[发明专利]抗原短肽用于筛选治疗与HPV相关的疾病的药物中的用途及其筛选的TCR

说明书

本申请公开了抗原短肽用于筛选治疗与HPV相关的疾病的药物中的用途及其筛选的TCR，所述抗原短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本申请所述的抗原短肽能够筛选特异性的T细胞受体(TCR)，同时转导了所述TCR的T细胞能够被特异性激活并且对表达A1101和HPV的肿瘤细胞具有很强的杀伤作用，可以用于宫颈癌等HPV阳性的肿瘤的免疫治疗，并且转导了本申请所述TCR的T细胞对表达E7的细胞系有很强的激活反应，对不表达E7的细胞系没有激活反应，并且对表达E7的细胞系有很强的杀伤功能，并能够有效抑制E7阳性肿瘤的生长。

技术领域

本申请涉及医药技术领域，尤其涉及抗原短肽用于筛选治疗与HPV相关的疾病的药物中的用途及其筛选的TCR。

背景技术

人类乳头瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一种DNA病毒，属于乳头瘤病毒科乳头瘤病毒属。该类病毒感染人体的表皮与黏膜组织，目前约有170种类型的HPV被判别出来，有些时候HPV入侵人体后会引起疣甚至癌症，但大多数时候则没有任何临床症状。

HPV导致癌症的一个重要因素是高危型HPV的持续感染，如HPV16、HPV18等。由高风险HPV编码的E6和E7蛋白可以分别抑制抑癌基因p53和Rb蛋白的活性，从而导致细胞周期异常，发生癌变。高危型HPV与90％的宫颈癌和肛门癌，40％至60％的阴道癌和阴茎癌有关，同时根据地理特性，还可能与60％的口咽癌相关。

宫颈癌是最常见的女性生殖道恶性肿瘤，全球发病率在女性恶性肿瘤中居第二位，且发展中国家的宫颈癌发病率显著高于高达国家。根据2018年最新统计，中国宫颈癌发病率为15.30/10万，死亡率为4.57/10万，高于全球平均发病率(10.61/10万)和死亡率(2.98/10万)。近10年来，宫颈癌发病率呈上升趋势，40-60岁为发病高峰年龄。尽管对于早期宫颈癌，手术和放化疗治疗效果较好，但是一半以上的患者初次就诊即被诊断为局部晚期宫颈癌。30％-70％的局部晚期宫颈癌患者会出现复发及(或)远处转移，而对于局部进展期和转移性宫颈癌，传统治疗的疗效十分有限，其五年生存率仅为57.1％和17.3％。

特异性T细胞免疫治疗是指利用针对肿瘤抗原的特异性T细胞来杀伤肿瘤细胞的方法，是一种高度个性化的肿瘤免疫治疗方法。由于肿瘤局部免疫抑制微环境的存在，病人体内的自身T细胞杀伤肿瘤的功能有限。因此，人们试图通过对T细胞进行基因改造的方法提高其杀伤肿瘤的能力。TCR-T和CAR-T均为基因修饰过的细胞治疗药物，通过转入的T细胞受体(T cell receptor,TCR)或嵌合抗原受体(CAR)基因与相应靶点结合后，即可激活T细胞，利用T细胞释放的颗粒酶、穿孔素、细胞因子等清除肿瘤细胞；但TCR-T和CAR-T的显著的不同点在于：CAR-T的靶点是细胞表面的膜蛋白，而TCR-T的靶点则是抗原短肽-MHC复合物(peptide-major histocompatibility complex,pMHC)。

HPV相关蛋白是宫颈癌最理想的T细胞免疫治疗靶点。TCR识别的靶点是“抗原短肽-MHC分子复合物”。TCR同时具有MHC限制性，理论上一个TCR分子仅能够特异性识别某一特定MHC递呈的短肽。MHC具有多态性，目前已发现的人类MHC(又称为人类白细胞抗原，human leukocyte antigen,HLA)等位基因数量超过15000个，且特定HLA在不同人群中的出现频率有很大差异，中国人群中最常见的HLA类型为HLA-A1101。HLA I类分子呈递的短肽长度为8-11个氨基酸，HLA II类分子呈递的短肽长度为12-24个氨基酸，这些抗原短肽的发现及鉴定是TCR-T治疗的前提。尽管短肽是否与HLA结合可以通过亲和力预测、HLA结合力测定等获得，但是该短肽能否被表达HPV的肿瘤细胞天然递呈，才是决定该短肽特异性的TCR能否用于肿瘤治疗的关键。

因此，本领域技术人员致力于寻找A1101限制性HPV抗原短肽，以及将发现的抗原短肽用于筛选可以特异性识别HPV阳性肿瘤细胞的TCR，从而使他们在T细胞免疫治疗中发挥作用。

发明内容