[发明专利]一种靶向检测CAH候选基因的二代测序试剂盒

说明书

本发明涉及一种靶向检测CAH候选基因的二代测序试剂盒，所述试剂盒包括：DNA提取试剂、特异性扩增引物、多重PCR引物、多重PCR扩增试剂。

技术领域

本发明属于基因测序领域，特别涉及一种靶向检测CAH候选基因的二代测序试剂盒。

背景技术

先天性肾上腺皮质增生症(Congenital adrenal hyperplasia,CAH)是一组常染色体隐性遗传病，属于性发育异常(disorders of sex development,DSD)疾病的一类，由肾上腺皮质类固醇激素合成酶或辅因子的基因突变引起。大约14种酶和辅因子参与肾上腺类固醇生成。随着十九世纪七八十年代，基因克隆与扩增技术的问世，有关人类疾病相关基因定位研究蓬勃兴起。1985年，Peterson等首次报道了由CYP21A2基因突变导致的男性假两性畸形。1988年，Kagimoto等首次发表关于CYP17A1基因突变导致的17α-羟化酶/17，20裂解酶缺陷症的研究。1991年，White等在摩洛哥血统的犹太人里发现了由CYP11B1基因Arg448His突变导致的11β羟化酶缺陷症。随后，由HSD3B2、StAR、CYP11A1、POR等基因突变导致的CAH被先后报道。目前，已报道包括CYP21A2、CYP17A1、CYP11B1、HSD3B2、StAR、CYP11A1、POR、H6PD、CYP11B2在内共9个基因的1000多种致病突变与CAH密切相关。突变类型多样，包括编码区单核苷酸变异(Single nucleotide variation,SNV)、小片段插入和缺失突变(insertion and deletion,Indel)、剪接突变(Splicing)、UTR区突变和大片段结构变异。大多数患者是复合杂合子，意味着在某个特定基因的两条等位基因上携带有不同的突变位点。通常患者的临床表现由酶活性保留更多、功能更强的等位基因决定，基因型和表型相关性良好。对于CAH患来说，其每个子代均有50％的概率成为无症状携带者。根据经典型21OHD的患病率1:10,000到1:20,000，推算普通人群中杂合子的概率为1:50-1:71。基因检测不仅有助于CAH的早期诊断、明确CAH亚型、指导临床治疗，而且可应用于产前诊断和遗传咨询，降低后代罹患疾病的风险。

超过90％的先天性肾上腺皮质增生症患者由CYP21A2双等位基因致病突变引起，导致最常见的CAH亚型，21α羟化酶缺陷症(21α-hydroxylasedeficiency,21OHD)。

CYP21A2基因位于6号染色体(6p21.3)，该区域易发生同源重组。CYP21A2的假基因(CYP21A1P)与其具有96-98％的核苷酸序列同源性，大约95％的CYP21A2致病突变由真假基因同源重组导致，包括65-70％的点突变，25-30％的大片段基因缺失和重组，另有5％由CYP21A2基因自发突变引起。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种靶向检测CAH候选基因的二代测序试剂盒。

本发明建立了一个CAH基因检测方法，包括一个同时检测CAH 9个候选基因二代测序方法(CAH panel)，和多重连接依赖探针扩增(Multiplex liga-tion-dependent probeamplification,MLPA)检测CYP21A2拷贝数变异，基于此种方法对具有类CAH症状的患者进行基因诊断。

本发明的一种靶向检测CAH候选基因的二代测序试剂盒，所述试剂盒包括：DNA提取试剂、特异性扩增引物、多重PCR引物、多重PCR扩增试剂。

所述特异性扩增引物为CYP21A2基因PCR扩增引物。

本发明的一种如所述靶向检测CAH候选基因的二代测序试剂盒构建方法，包括：

(1)确定CAH候选基因，具体为CYP21A2、CYP17A1、CYP11B1、HSD3B2、StAR、CYP11A1、POR、H6PD、CYP11B2；