[发明专利]茶树黄酮醇类合成候选基因CsNAC086及其应用

权利要求书

1.一种茶树NAC转录因子在构建过表达黄酮醇的植株中的应用，其特征在于：所述茶树NAC转录因子的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示;所述植株为烟草。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述茶树NAC转录因子的编码基因如SEQ IDNO：1所示。

3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于：以所述茶树NAC转录因子的编码基因构建重组质粒，将所述重组质粒转入农杆菌中，得到重组基因工程菌。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述重组质粒的载体为pCAMBIA2300载体。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述重组质粒按如下方法构建：

（1）以从Camellia sinensis CV. Zijuan新梢叶片提取的总RNA为模板，反转录得到cDNA，以所述cDNA为模板，通过以下引物进行PCR扩增得到茶树NAC转录因子的编码基因：pCAMBIA2300-CsNAC086-F：5’-ATGGCACCTGTTTCGTTGCC-3’，

pCAMBIA2300-CsNAC086-R：5’-CTATGGGGAATTAGGTGCAATATGC-3’；

（2）用限制性内切酶BamH I与Sal I对 pCAMBIA2300载体进行双酶切，得到线性化载体；以ClonExpress ® II One Step Cloning Kit对步骤（1）所述茶树NAC转录因子的编码基因和所述线性化载体进行一步克隆，以所得一步克隆的产物转化感受态细胞，经含卡那霉素的培养基筛选和测序验证后，挑选阳性克隆培养并提取质粒，即得到所述重组质粒。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述重组基因工程菌按如下方法构建：热激法将所述重组质粒转入农杆菌GV3101感受态细胞，经含所述重组质粒的载体所携带的抗性基因指向的抗生素的YEB固体培养基筛选，菌落PCR检验，得到所述重组基因工程菌。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述过表达黄酮醇的植株按如下方法构建：

将本氏烟草Nicotiana benthamiana无菌苗上部完全展开的幼嫩叶片裁剪成小块浸泡于所述重组基因工程菌的菌液中10 min，所述重组基因工程菌的菌液的OD₆₀₀为0.6；取出叶片后，转移无菌滤纸上吸干液体，然后于共培养培养基上28℃暗培养三天；然后转入出芽选择培养基中在28℃的培养温度下按照光照16 hr/d，黑暗8 hr/d进行培养，进行抗性芽的筛选；切下所得抗性芽转入壮苗选择培养基，在28℃的培养温度下按照光照16 hr/d，黑暗8hr/d进行生根培养，即得到所述过表达黄酮醇的植株。