[发明专利]一种呈现TD1稳转细胞及其构建方法、呈现TD1工程化外泌体及其制备方法和应用在审
申请号: | 202210509495.5 | 申请日: | 2022-05-10 |
公开(公告)号: | CN114752627A | 公开(公告)日: | 2022-07-15 |
发明(设计)人: | 李柱;路瑛 | 申请(专利权)人: | 厦门星际诺康细胞科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N15/62;C12N5/10;C12N5/0775;A61K8/64;A61K8/98;A61K8/99;A61Q19/00 |
代理公司: | 厦门加减专利代理事务所(普通合伙) 35234 | 代理人: | 卢艺玲 |
地址: | 361000 福建省厦门火炬*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 呈现 td1 细胞 及其 构建 方法 工程 化外 制备 应用 | ||
1.一种呈现TD1稳转细胞的构建方法,其特征在于,其包括如下步骤:
S100、将透皮肽TD1基因序列定向插入到外泌体膜蛋白的基因序列中获得融合蛋白表达载体;
S200、将所述S100制得的融合蛋白表达载体和包装质粒共同转染293T细胞得到慢病毒;
S300、将所述S200制得的慢病毒转染间充质干细胞即得所述稳转细胞。
2.根据权利要求1所述的呈现TD1稳转细胞的构建方法,其特征在于:所述外泌体膜蛋白为ALIX、tsg101、Lamp2、CD63、CD9或CD81。
3.根据权利要求1所述的呈现TD1稳转细胞的构建方法,其特征在于:所述透皮肽TD1基因序列为GCTTGTTCTTCTTCCCCATCTAAGCATTGTGGG。
4.根据权利要求1所述的呈现TD1稳转细胞的构建方法,其特征在于:所述包装质粒由PMDLg/pRRE、pVSV-G和pRSV-Rev构成。
5.根据权利要求1所述的呈现TD1稳转细胞的构建方法,其特征在于:每80~100万个293T细胞中加入1~3ug融合蛋白表达载体和1.5~3ug包装质粒。
6.一种呈现TD1稳转细胞,其特征在于:采用如权利要求1~5任一项所述的呈现TD1稳转细胞的构建方法得到。
7.根据权利要求6所述的呈现TD1稳转细胞,其特征在于:所述融合蛋白表达载体由透皮肽TD1基因序列通过分子克隆的方式插入到Lamp2的基因序列中制得,其序列如SEQ IDNO.1所示。
8.一种呈现TD1工程化外泌体的制备方法,其特征在于:通过将如权利要求6~7任一项所述的呈现TD1稳转细胞进行培养并收集细胞进行破碎、离心取上清即得所述呈现TD1工程化外泌体。
9.一种呈现TD1工程化外泌体,其特征在于:采用权利要求8所述的制备方法制得。
10.一种权利要求8所述的工程化外泌体在化妆品中的应用。
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