[发明专利]一株分泌抗除草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用

说明书

本发明涉及一株分泌抗除草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫检技术领域。本发明所述的杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45113，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。本发明提供的交瘤细胞株分泌的单克隆抗体，对除草醚和甲羧除草醚具有较好的特异性(对二苯醚类其他药物交叉率小于1％)和检测灵敏度(IC₅₀值分别为0.96ng/mL和0.73ng/mL)，可实现对谷物、油料、蔬菜、水果、调味料以及生乳中除草醚残留量的检测，为食品中除草醚和甲羧除草醚残留的免疫学检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及食品安全免疫检技术领域，尤其涉及一株分泌抗除草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

除草醚(Nitrofen)是一种水旱田除草剂，在各种土质、气温条件下均可适用，主要防治某些一年生阔叶及禾本科杂草，可用于白菜、甘蓝、萝卜、油菜、芥菜、水萝卜、茎兰、菜花、芹菜、胡萝卜、香菜、茵香、葛笋、阁蒿、菠菜等以及某些豆科蔬菜等菜田。除草醚作为醚类选择性触杀型除草剂，由于对试验动物具有致畸、致突变、致癌作用，多数国家已禁止生产和使用。

测定除草醚含量的分析方法目前研究较少，主要有气相色谱-串联质谱法(GC-MS/MS)和高效液相色谱法(HPLC-UV)等仪器方法，这些检测方法具有耗时、步骤繁琐、无法进行现场快速检测、成本高等缺点，因此建立快速简便的除草醚检测方法具有重要意义。酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，适用于大量样本的现场快速检测，为除草醚检测提供了一种新的检测途径。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于克服现有技术中上述仪器针对除草醚检测的不足。

为解决上述技术问题，本发明提供了一株分泌抗除草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，由该细胞株分泌的抗体针对除草醚具有较高的检测灵敏度，可以用来建立除草醚的免疫学检测方法。

本发明的第一个目的是提供一株分泌抗除草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株于2022年03月03日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.45113，本发明所得的杂交瘤细胞株属于单克隆细胞株。

本发明的第二个目的是提供一株分泌抗除草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤，

S1、将甲羧除草醚溶于有机溶剂，加入碱性溶液加热至50-80℃回流反应10-14h，得到除草醚半抗原；

S2、使用S1中所述除草醚半抗原制备除草醚完全抗原，将所得的除草醚完全抗原制备成含抗原弗氏完全佐剂与含抗原弗氏不完全佐剂；

S3、对免疫动物进行首次免疫、加强免疫和冲刺免疫，首次免疫采用S2中所述含抗原弗氏完全佐剂，加强免疫采用S2中所述含抗原弗氏不完全佐剂，冲刺免疫采用S2中所述除草醚完全抗原；

S4、取S3中冲刺免疫后的免疫动物的脾细胞和骨髓瘤细胞进行细胞融合，得到所述抗除草醚单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

在本发明的一个实施例中，在S1中，还包括用酸性溶液调节pH至酸性，再进行萃取和干燥步骤。

在本发明的一个实施例中，所述萃取是使用乙酸乙酯萃取三次。

在本发明的一个实施例中，所述酸性溶液为盐酸溶液。

在本发明的一个实施例中，所述干燥是55-65℃旋转蒸馏干燥。

在本发明的一个实施例中，在S1中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中的一种或多种。