[发明专利]氧气浓度梯度微环境的构建方法及其应用

权利要求书

1.氧气浓度梯度微环境的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.打开高氧阀(3)，高氧分压的混合气体从高氧气瓶(1)经高氧表(2)后，由高氧入口(9d)进入到微芯片(9)的高氧通道(9c)；然后高氧分压的混合气体从高氧出口(9e)经高氧出气管(13)排至集气瓶(12)；

S2.同时打开低氧阀(8)，低氧分压的混合气体从低氧气瓶(6)输出，经低氧表(7)后由低氧入口(9g)进入到微芯片(9)的低氧通道(9f)；然后低氧分压的混合气体由低氧出口(9h)经低氧出气管(14)排至集气瓶(12)；

S3.维持20-40min后，高氧通道(9c)与低氧通道(9f)之间形成氧气分压差；芯片(9)中PVDC膜隔绝大气干扰，被测通道的氧气分压差由高氧通道(9c)与低氧通道(9f)中氧气浓度进行调控。

2.根据权利要求1所述的氧气浓度梯度微环境的构建方法，其特征在于：在高氧通道(9c)与低氧通道(9f)之间均布主通道：主通道之间形成梯度变化的氧气环境。

3.根据权利要求1所述的氧气浓度梯度微环境的构建方法，其特征在于：在高氧通道(9c)与低氧通道(9f)之间按列均布测试腔室，不同列的测试腔室之间形成梯度变化的氧气环境。

4.根据权利要求1所述的氧气浓度梯度微环境的检测应用，包括以下步骤：

S1.试样的配制及注入

对荧光染料溶液的荧光测试：使用对氧气有荧光响应信号的荧光染料，将其在溶剂中稀释后，通入芯片主通道；

对活细胞中的荧光测试：将待测细胞种在芯片主通道中，在37℃细胞培养箱中培养，细胞贴壁；使用对氧气有荧光响应信号的荧光染料在细胞培养液中稀释，在37℃细胞培养箱中孵育活细胞进行染色，将细胞外多余荧光染料替换为无背景荧光的细胞培养液；

S2.构建氧气环境：采用氧气浓度梯度微环境的构建方法，使高氧通道(9c)与低氧通道(9f)之间形成氧气分压差，在不同的被测通道上构建出不同的氧气环境；

S3.荧光信息的采集

启动高分辨荧光检测仪，并根据试样中荧光染料进行激发波长的选择，检测器前放置长通/带通滤光片；采集试样的发光寿命或荧光强度。