[发明专利]一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系

权利要求书

1.一种用于抑制XPB表达物质，其特征在于：包括小干扰RNA与shRNA其中的任意一种，所述小干扰RNA为siRNA1、siRNA2与siRNA3其中的任意一种，

所述siRNA1的正向核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述siRNA1的反向核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；

所述siRNA2的正向核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，所述siRNA2的反向核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；

所述siRNA3的正向核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，所述siRNA3的反向核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；

所述shRNA的双链模板DNA的正向序列如SEQ ID NO：11所示；述shRNA的双链模板DNA的反向序列如SEQ ID NO：12所示。

2.一种用于抑制XPB表达载体，其特征在于：表达载体包括如权利要求1中SEQ ID NO：3-4或SEQ ID NO：11-12所示的序列。

3.如权利要求2所述的一种用于抑制XPB表达载体，其特征在于：所述载体为病毒、真菌与细菌表达载体其中的一种。

4.一种抑制XPB表达的细胞，其特征在于：细胞为人微血管内皮细胞HMEC-1。

5.一种重组慢病毒表达载体的制备方法，其特征在于，包括下列步骤：

1)将SEQ ID NO：11所示的单链DNA分子与SEQ ID NO：12所示的单链DNA分子退火形成带粘性末端的DNA双链片段；

2)将慢病毒载体pHBLV-U6-MCS-PGK-NEO通过限制性内切酶1与限制性内切酶2进行酶切，将步骤1)中得到的DNA双链片段通过T4连接酶连入载体，得到重组慢病毒载体。

6.一种如权利要求5所述的重组慢病毒载体用于XPB低表达的微血管内皮细胞系的构建方法，其特征在于，包括下列步骤：

1)将重组慢病毒载体联合病毒包装辅助质粒pSPAX2与pMD2G构成三质粒慢病毒系统进行病毒包装，进而转染293T细胞，获得病毒液；所述的重组慢病毒载体为权利要求5所述的制备方法制备所得的重组慢病毒载体；

2)用步骤1)获得的病毒液感染微血管内皮细胞系，筛选获得XPB低表达的微血管内皮细胞系，即XPB低表达的微血管内皮细胞系。

7.一种如权利要求1所述的siRNA2的应用，其特征在于：包括制备用于抑制XPB表达的试剂；

制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化的产品；

制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力的产品；

制备用于构建XPB低表达的表达载体、细胞模型或动物模型的产品；

体外抑制XPB表达；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力；

构建XPB低表达的表达载体或细胞模型。

8.一种用于抑制XPB表达载体与重组慢病毒表达载体的应用，其特征在于：包括制备用于抑制XPB表达的试剂；

制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化的产品；

制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力的产品；

制备用于构建XPB低表达的细胞模型或动物模型的产品；

体外抑制XPB表达；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力；

构建XPB低表达的细胞模型。

9.一种抑制XPB表达载体的细胞应用，其特征在于：包括制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化的产品；

制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力的产品；

制备用于构建XPB低表达的动物模型的产品；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力。

10.一种如权利要求6所述的构建方法构建XPB低表达的微血管内皮细胞系的应用，其特征在于：包括制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化的产品；

制备用于抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力的产品；

制备用于构建XPB低表达的动物模型的产品；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞发生内皮间质转分化；

体外抑制缺氧条件下微血管内皮细胞迁移能力。