[发明专利]一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系

说明书

本发明公开了一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系，包括小干扰RNA与shRNA其中的任意一种，所述小干扰RNA为siRNA1、siRNA2与siRNA3其中的任意一种，本发明XPB siRNA2与XPB shRNA2能抑制人微血管内皮细胞中XPB的表达；XPB shRNA2能抑制HMEC‑1在缺氧条件下的内皮间质转分化，抑制细胞的迁移能力；RNAi技术抑制微血管内皮细胞中XPB基因的表达，构建XPB低表达的微血管内皮细胞模型，研究XPB在内皮间质化发生发展中的重要作用，有助于揭示内皮间质化的潜在机制，为治疗由内皮间质化所致的心血管疾病提供有用的线索。本发明具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及医学分子生物学和基因工程技术领域，尤其涉及一种用于抑制XPB表达物质及其XPB低表达的内皮细胞系。

背景技术

通用转录因子TFIIH(transcription factor IIH)在转录起始和DNA损伤修复发挥着重要的功能，参与细胞周期调控和染色体分离。TFIIH是由10个亚基组成的多蛋白复合物，结构上分为由XPB/ERCC3,XPD/ERCC2，TTDA/p8/GTF2H5,p34/GTF2H3,p44/GTF2H2,p52/GTF2H4和p62/GTF2H1构成的核心亚复合物和由CDK7,Cyclin H和MAT1构成的细胞周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependent-kinase，CDK)激活激酶(CDK-activating kinase，CAK)亚复合物。人着色性干皮病B组(xeroderma pigmentosum group B，XPB)基因，又称切除修复交叉互补3(excision repair cross complementing 3，ERCC3)基因，其编码蛋白作为TFIIH中最大的亚基，具有从3’端-5’端ATP依赖的单链DNA(single-stranded DNA,ssDNA)解旋酶活性，执行依赖DNA的ATP酶和从3’端-5’端的解旋酶功能，在转录起始和核苷酸切除修复中具有不可或缺的作用。此外，XPB还能与p53等分子互作，参与凋亡调控。当前已广泛证实XPB与着色性干皮病、癌症的发生有着密切的关系，研究大多以成纤维细胞和癌症细胞为模型。XPB在心血管疾病中的研究目前较为欠缺。

内皮细胞在缺氧、氧化应激、TGF-β作用等应激条件下会发生内皮向间质转分化(Endothelial to Mesenchymal Transition，EndMT)，表现为CD31、Ve-Cadherin等内皮细胞特征性标记物的丢失，α-SMA、FSP-1等间质细胞特征性标记物的获得，同时伴随着细胞形态的变化：由紧密的鹅卵石样转变为纺锤状。除了形态的改变，经历间质化转变的内皮细胞其小管形成、抗血小板生成、凝集素结合的能力下降，而迁移、侵袭、收缩、胶原合成的能力增强。EndMT已被证实在胚胎发育时瓣膜、隔膜等组织器官的生长发育中起到关键作用，EndMT同时也被证实参与了肺动脉高压、瓣膜疾病、动脉粥样硬化、心肌纤维化等心血管疾病的进程。当前已经发现了TGF-β通路、Hippo等经典信号通路参与了EndMT，但内皮间质化作为复杂的生物学过程在不同的疾病中呈现各异的特征。因此其所涉及的分子机制和信号通路还有待被发现和补充，以期找寻逆转EndMT的有效靶点，为心血管疾病的干预提供新的思路。

RNAi技术指的是，将靶基因mRNA对应的双链RNA(dsRNA)导入细胞，通过碱基互补配对识别靶基因mRNA并诱导其发生降解，导致靶基因沉默的基因干扰技术。dsRNA一般指的是全长20-25bp的双链RNA分子，称为小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)，或沉默RNA、短干扰RNA。除了在化学物质、多肽、蛋白质等佐剂辅助或修饰下的直接递送，当前利用表达短发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)基因的慢病毒、腺病毒、腺相关病毒逐渐成为科研人员青睐的有效递送和细胞转染方式，其优势在于转染效率高，干扰持续时间长甚至可以在全生命周期实现靶基因的敲低，为探究靶基因在生命活动中的作用提供极大帮助。