[发明专利]一种羰基还原酶突变体及其在制备R-扁桃酸中的应用在审
| 申请号： | 202210521039.2 | 申请日： | 2022-05-12 |
| 公开（公告）号： | CN115029329A | 公开（公告）日： | 2022-09-09 |
| 发明（设计）人： | 谷绪顶;李武威;马飞鸿;杜项龙 | 申请（专利权）人： | 上海瀚鸿科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/70;C12N1/21;C12P7/42;C12R1/19 |
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| 地址： | 200237 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 羰基 还原酶 突变体 及其 制备 扁桃 中的 应用 | ||
1.一种羰基还原酶突变体，其特征在于，该菌株羰基还原酶基因经测序突变位点为：将SEQ ID NO.2所示有害片球菌Pediococcus damnosus野生型氨基酸序列第106位丙氨酸突变为亮氨酸，突变体氨基酸序列为SEQ ID NO.3所示。
2.一种重组载体，其特征在于：采用权利要求1所述羰基还原酶突变体构建。
3.一种重组基因工程菌，其特征在于：采用权利要求2所述重组载体转化制备。
4.权利要求1所述羰基还原酶突变体在制备R-扁桃酸中的应用。
5.根据权利要求4所述羰基还原酶突变体在制备R-扁桃酸中的应用，其特征在于：以苯甲酰甲酸为底物和pH＝7.5PB缓冲液为反应介质，在含有羰基还原酶突变体的重组基因工程菌存在下，进行还原反应后得到R-扁桃酸。
6.根据权利要求5所述羰基还原酶突变体在制备R-扁桃酸中的应用，其特征在于：还原反应在水浴控温、磁力搅拌条件下进行。
7.根据权利要求5所述羰基还原酶突变体在制备R-扁桃酸中的应用，其特征在于：酶源通过以含羰基还原酶突变体编码基因的重组工程菌经诱培养获得的菌液经裂解获得，所述酶源按如下方法制备：取不同突变体菌液以及未突变菌种18uL接种于1.8mL LB培养基，同时加入2uL 100mg/mL Kan溶液，37℃振荡培养至菌体浓度OD 600nm为0.6-0.8，15℃静置30min，之后加入2uL 200mg/mL IPTG溶液，16℃振荡诱导24h；使用96孔板离心机进行离心，离心后沉淀加0.2mL裂解液重悬，超声破碎，4℃，3000×g，10min离心，破碎上清保留，用于酶活分析。
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