[发明专利]猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，所述检测试剂盒包含化学发光包被板、酶标抗体、血清稀释液、O型阳性对照血清、A型阳性对照血清、阴性对照血清、发光底物A、发光底物B和10倍浓缩洗涤液，其特征在于：

所述化学发光包被板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，奇数列包被猪口蹄疫病毒O型VP1纳米抗体，偶数列包被猪口蹄疫病毒A型VP1纳米抗体；

其中，猪口蹄疫病毒O型VP1纳米抗体的氨基酸序列为：LQEWGAGLYSWALKPTSELSLTPGKGDQWGQGTLVTVLEWIYGSWIRQPGEIWNHDGFNPVASLKSQ FSLKSLSVTATAA DVYYCAEGRWEDSLRVTISVDTSNNSKNNSSASTKG；

猪口蹄疫病毒A型VP1纳米抗体的氨基酸序列为：LQERRAVTLDGLQESGGTPGGAVCKALSLSGFIFSSYDMAWVRQAPSKGYVLEASISSGGSFTYYGAA VKGGRTIISRDGTNGQSTVRLQLNRAEDAGTFYCAKAADSDNLYAWSADNIDAWGHEVIVSSLDKG；所述包被过程为：将O型VP1纳米抗体蛋白加入到pH＝9.6的碳酸盐缓冲液中，使蛋白的浓度均为1ug/mL，以100uL/孔的加样量将蛋白包被液加入到奇数列化学发光板中；将A型VP1纳米抗体蛋白加入到pH＝9.6的碳酸盐缓冲液中，使蛋白的浓度均为1ug/mL，以100uL/孔的加样量将蛋白包被液加入到偶数列化学发光板中，2-8℃孵育16-18h；甩掉化学发光板中的蛋白包被液，向每孔中加入150uL/孔的5％BSA-PBST进行封闭，37℃封闭2h；甩掉化学发光板中的封闭液，25℃干燥2h，放入干燥剂，密封包装，2-8℃保存；

所述O型阳性对照血清是经疫苗免疫健康猪获得的猪血清；

所述A型阳性对照血清是经疫苗免疫健康猪获得的猪血清；

所述阴性对照血清是未免疫过任何疫苗的健康猪血清；

所述酶标抗体为辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG抗体。

2.如权利要求1所述的一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，其中血清稀释液为含5％v/v酪蛋白和0.5％v/v Tween-20的磷酸盐缓冲液，pH＝7.4。

3.如权利要求1所述的一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，其中发光底物A为含有0.1mmol/L的鲁米诺和质量体积分数为0.1％的羟基香豆素；溶剂为0.05mol/L、pH＝8.0的Tris缓冲液。

4.如权利要求1所述的一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，其中发光底物B为含有0.07mmol/L的维生素C和3mmol/L氨基酸氧化酶，溶剂为0.05mol/L、pH＝5.2的醋酸铵溶液。

5.如权利要求1所述的一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，其中10倍浓缩洗涤液为0.02mol/L的磷酸二氢钠、0.08mol/L的磷酸氢二钠、1.37mol/L的氯化钠和0.5％v/vTween-20，pH＝7.4。

6.如权利要求1所述的一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，其中检测步骤如下：将待检血清用血清稀释液1：50倍稀释，取100uL分别加入到化学发光包被板奇数列和偶数列中，同时在奇数列设置O型阳性对照血清和阴性对照血清作为对照，在偶数列设置A型阳性对照血清和阴性对照血清作为对照；将化学发光包被板于37℃反应15min；用洗涤液洗涤5次，加入用5％BSA-PBST稀释10000倍的辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG抗体，37℃孵育15min；再经洗涤液洗涤5次，加入发光底物A和发光底物B，15-25℃反应5min，用化学发光免疫分析检测仪器检测发光值。