[发明专利]猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒及其应用，所述试剂盒包含化学发光包被板、酶标抗体、血清稀释液、O型阳性对照血清、A型阳性对照血清、阴性对照血清、发光底物A、发光底物B和10倍浓缩洗涤液。本发明所述试剂盒，能同时检测并区分O型和A型猪口蹄疫病毒，具有良好的敏感性、特异性和诊断能力，重复性与稳定性也良好。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域，涉及一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒。

背景技术

口蹄疫是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus，FMDV)引起的,发生于牛、羊、猪等偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病。FMDV属于小核糖核酸病毒科，口疮病毒属。根据病毒的血清学特性，目前已知全世界有7个主型：A、O、C、南非1、南非2、南非3和亚洲I型。同一血清型内又有若干个不同的亚型，各血清型之间几乎没有交叉免疫性，同一血清型内各亚型之间仅有部分交叉免疫性。

口蹄疫是亚洲、非洲和南美洲许多发展中地区偶蹄类动物最具传染性和经济破坏性的疾病之一，我国流行的口蹄疫以A型和O型为主，预防监测和免疫扑杀是我国目前防控口蹄疫的主要手段。我国动物免疫使用的主要为口蹄疫病毒O型-A型二价疫苗。OIE推荐的检测口蹄疫抗体的标准方法为中和试验，但中和试验需要使用活病毒，需在特殊实验室完成，且操作费时，酶联免疫吸附分析法具有操作试验操作简便、检测速度快的优点，因此得到广泛应用。市场上已经有许多检测单一抗体类型的商品化ELISA试剂盒，但这些ELISA方法常常不能满足临床检测的需求，无法判定抗体类型，不利于确认可疑动物、无感染动物和免疫效力的评价。VP1抗体的产生时间和应答水平存在个体差异，有时在免疫或感染的猪机体内并不能检测到VP1抗体或VP1抗体产生的时间延迟，所以，其结果会出现假阴性，准确性不高。对于那些已经免疫后又感染的动物，由于具有中和抗体使得病毒的复制很慢，导致体内具有很低浓度的特异性蛋白，但商品化的ELISA试剂盒敏感性低，使这些低浓度的特异性蛋白很难被检测到，导致部分感染动物漏检。因此，需要一种更敏感性、高效的检测方法，对预防和控制口蹄疫的发生和流行将具有重要意义。

微孔板式化学发光免疫分析技术(CLIA)是在放射性免疫和酶联免疫分析的基础上逐渐发展建立的，具有试验材料易获取，对试验环境、设备及人员的要求较低、试验操作简便、检测速度快等优点。但是化学发光不需要不需要额外的光源或背景荧光，所有的能量都来自于样本本身的化学反应，消除了背景影响，避免了外来因素(光源稳定性、光散射、光波选择器)的干扰，可以在很宽的线性范围内检测极低浓度的分析物。同时光信号强度和待测物质的浓度呈线性关系，可以根据仪器的标定曲线，精确算出待测物的浓度。因此敏感性、特异性、稳定性和安全性上明显优于放射性免疫和酶联免疫分析方法。

目前市面上同时检测和区分猪口蹄疫O型和A型抗体检测的基于化学发光免疫分析方法制备的微孔板式试剂盒还没有。本试剂盒为口蹄疫的诊断提供了更加灵敏、便捷、有效、快速的检测方法，而且更适用于低浓度样本的检测以及疾病的早期诊断，对应预防和控制口蹄疫的发生和流行具有十分重要的意义。

发明内容

针对猪口蹄疫病毒检测所面临的问题，本发明拟提供一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，该试剂盒相对于市场上常用的试剂盒产品，敏感性更高，特异性更强，可以区分猪口蹄疫O型和A型抗体类型，诊断能力亦优于其他市售产品。

一种猪口蹄疫病毒O型和A型抗体微孔板式化学发光检测试剂盒，所述检测试剂盒包括化学发光包被板、酶标抗体、血清稀释液、O型阳性对照血清、A型阳性对照血清、阴性对照血清、发光底物A、发光底物B和10倍浓缩洗涤液；

所述化学发光包被板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔板，奇数列包被猪口蹄疫病毒O型VP1纳米抗体蛋白，偶数列包被猪口蹄疫病毒A型VP1蛋白；