[发明专利]一种樟芝菌硒多糖的制备方法

权利要求书

1.一种樟芝菌硒多糖的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

（1）将樟芝菌以体积比15%接种量接种于含有无机硒的发酵培养基中，温度28℃，150r/min培养9d，获得发酵液，所述含有无机硒的发酵培养基的组成为Na₂SeO₃ 2 mg/L、麦芽糖24 g/L、可溶性淀粉16 g/L、玉米浆干粉9 g/L，硫酸铵9 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L、K₂HPO₄0.5 g/L、pH值7.0；

（2）将步骤（1）的发酵液过滤获得樟芝菌菌丝体，利用蒸馏水冲洗樟芝菌菌丝体直至水洗液无色并收集沉淀，置于55℃恒温烘箱中烘干研磨后得到樟芝菌菌丝体粉末；

（3）将步骤（2）的樟芝菌菌丝体粉末加入蒸馏水，置于80℃恒温水浴锅中浸提1 h，重复2次；收集上清液，采用加热减压浓缩，将所得上清液体积浓缩至原体积的1/2，浓缩温度为50℃，真空度0.70 Mpa，获得浓缩液；在浓缩液中加入4倍体积的无水乙醇，静置过夜，弃去上清液，将沉淀物冷冻浓缩，得樟芝菌富硒粗多糖；

（4）将步骤（3）的樟芝菌富硒粗多糖以去离子水溶解，配置成多糖溶液，加入多糖溶液体积5倍的 Sevag 试剂，充分震荡反应20 min，4000 r/min离心15 min后，除去氯仿层和中间的蛋白质层，取上清液继续进行除蛋白操作，直至没有变性蛋白层的出现；合并上清液，将多糖溶液浓缩和冷冻干燥，得到多糖粉末；将所得多糖粉末依次用丙酮、无水乙醇洗涤多糖粉末，待其沉淀后静置，更换溶液，重复三次，沉淀冷冻干燥，得到脱蛋白硒多糖；

将所得脱蛋白硒多糖以去离子水溶解，上样至已平衡好的DEAE-52纤维素离子交换层析柱中，平衡液为去离子水；洗脱过程中洗脱液分别为去离子水、0.1 mol/L的NaCl水溶液；脱蛋白硒多糖上样量为200 mg，以蠕动泵控制流速为1 mL/min，采用自动收集器以5 min/管的频率收集洗脱液，合并目标组分，浓缩、冻干，加蒸馏水复溶，重复上样2次得樟芝菌硒多糖纯品。