[发明专利]一种杆状病毒载体及其在昆虫细胞中制备rAAV的应用有效
| 申请号： | 202210528997.2 | 申请日： | 2022-05-16 |
| 公开（公告）号： | CN114736928B | 公开（公告）日： | 2023-06-27 |
| 发明（设计）人： | 请求不公布姓名 | 申请（专利权）人： | 睿征医药科技（武汉）有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N7/00;C12N5/10;C12N15/34;C12R1/93 |
| 代理公司： | 武汉华之喻知识产权代理有限公司 42267 | 代理人： | 王珣珏;张彩锦 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 杆状病毒 载体 及其 昆虫 细胞 制备 raav 应用 | ||
1.一种用于制备重组杆状病毒的杆状病毒穿梭载体，其特征在于：包含外源基因表达盒与稳定序列，所述稳定序列位于距离所述外源基因表达盒的5kb以内，所述稳定序列为CNE序列或NAE序列；
所述外源基因表达盒为AAV的cap基因表达盒、AAV的rep基因表达盒和带有异源功能基因的AAV ITR核心表达元件中的至少一个；所述稳定序列位于距离所述cap基因表达盒的起始端和末端、所述rep基因表达盒起始端和末端以及所述带有异源功能基因的AAV ITR核心表达元件的一端和另一端中的至少一处的5kb以内；
利用该杆状病毒穿梭载体感染昆虫细胞，在连续传代中，保证了重组杆状病毒的传代稳定性。
2. 根据权利要求1所述的杆状病毒穿梭载体，其特征在于：所述外源基因表达盒为所述带有异源功能基因的AAV ITR核心表达元件和所述cap基因表达盒。
3.根据权利要求1所述的杆状病毒穿梭载体，其特征在于：所述重组杆状病毒穿梭载体是通过重组杆状病毒转移载体介导的Tn7转座将所述外源基因表达盒与所述稳定序列插入到杆状病毒穿梭载体的转座插入位点而得到，所述杆状病毒穿梭载体上的杆状病毒基因组中缺失CNE序列或NAE序列。
4.一种权利要求1、2或3所述的杆状病毒穿梭载体在昆虫细胞中制备重组杆状病毒的应用。
5.一种昆虫细胞，其特征在于：包含权利要求1、2或3所述的杆状病毒穿梭载体。
6.一种体外生产重组杆状病毒的方法，其特征在于：包括培养权利要求5所述的昆虫细胞，得到所述重组杆状病毒。
7.一种用于制备重组腺相关病毒的杆状病毒穿梭载体，其特征在于：包含外源基因表达盒与稳定序列，所述稳定序列位于距离所述外源基因表达盒的5kb以内，所述稳定序列为CNE序列或NAE序列；
所述外源基因表达盒为AAV的cap基因表达盒和AAV的rep基因表达盒，所述稳定序列位于所述cap基因表达盒与所述rep基因表达盒之间，且其两端分别靠近所述cap基因表达盒的起始端和所述rep基因表达盒的起始端；或者所述外源基因表达盒为带有异源功能基因的AAV ITR核心表达元件；所述稳定序列位于距离所述带有异源功能基因的AAV ITR核心表达元件的一端或另一端的5kb以内；
利用该杆状病毒穿梭载体感染昆虫细胞，在连续传代中，保证了重组腺相关病毒的传代稳定性。
8.根据权利要求7所述的杆状病毒穿梭载体，其特征在于：所述重组杆状病毒穿梭载体是通过重组杆状病毒转移载体介导的Tn7转座将所述外源基因表达盒与所述稳定序列插入到杆状病毒穿梭载体的转座插入位点而得到，所述杆状病毒穿梭载体上的杆状病毒基因组中缺失CNE序列或NAE序列。
9.一种权利要求7所述的杆状病毒穿梭载体在昆虫细胞中制备重组腺相关病毒的应用。
10.一种昆虫细胞，其特征在于：包含权利要求7所述的杆状病毒穿梭载体。
11.一种体外生产重组腺相关病毒的方法，其特征在于：包括培养权利要求10所述的昆虫细胞，得到所述重组腺相关病毒。
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