[发明专利]一种用于昆虫细胞中产生重组杆状病毒的组合物、方法及应用

权利要求书

1.一种用于昆虫细胞中产生重组杆状病毒的组合物，其特征在于：包含包装缺陷型杆状病毒质粒和第一拯救重组DNA，所述包装缺陷型杆状病毒质粒缺失杆状病毒基因组中的CNE序列或NAE序列，所述第一拯救重组DNA包含第一插入序列以及位于所述第一插入序列两侧的第一同源臂，所述第一插入序列包含第一功能片段和第一回补序列，所述第一回补序列为所述包装缺陷型杆状病毒质粒所缺失的序列，所述组合物能够在昆虫细胞中发生同源重组以产生重组杆状病毒；

所述第一功能片段为带有外源基因的AAV ITR核心表达元件、报告基因或编码治疗性基因产物的核苷酸序列；或者所述第一功能片段为AAV的cap基因表达盒和AAV的rep基因表达盒。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述第一功能片段为AAV的cap基因表达盒和AAV的rep基因表达盒，所述第一插入序列按从5’至3’的顺序包含所述cap基因表达盒、所述第一回补序列和所述rep基因表达盒。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述第一回补序列位于所述cap基因表达盒与所述rep基因表达盒之间，且其两端分别靠近所述cap基因表达盒的起始端和所述rep基因表达盒的起始端。

4. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述第一功能片段为AAV的cap基因表达盒和AAV的rep基因表达盒，所述包装缺陷型杆状病毒质粒为包含带有外源基因的AAVITR核心表达元件的重组杆粒。

5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于：所述重组杆粒通过杆状病毒转移载体介导的Tn7转座得到。

6. 根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述第一功能片段为带有外源基因的AAV ITR核心表达元件，所述包装缺陷型杆状病毒质粒为包含AAV cap基因表达盒和AAVrep基因表达盒的重组杆粒。

7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于：所述重组杆粒通过杆状病毒转移载体介导的Tn7转座得到。

8.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：还包含第二拯救重组DNA，所述包装缺陷型杆状病毒质粒缺失杆状病毒基因组中的CNE序列和NAE序列，所述第二拯救重组DNA包含第二插入序列以及位于所述第二插入序列两侧的第二同源臂，所述第二插入序列包含第二回补序列，所述第一回补序列为CNE序列或NAE序列，所述第二回补序列为CNE序列和NAE序列中不同于第一回补序列的序列。

9. 根据权利要求8所述的组合物，其特征在于：所述第一功能片段为AAV的cap基因表达盒和AAV的rep基因表达盒，所述第二插入序列还包含第二功能片段，所述第二功能片段为带有外源基因的AAV ITR核心表达元件。

10.一种权利要求1-9任一所述的组合物在昆虫细胞中制备重组杆状病毒或重组腺相关病毒的应用。

11.一种昆虫细胞，其特征在于：包含权利要求1-9任一所述的组合物。

12.一种体外生长或产生重组杆状病毒的方法，其特征在于：包括将权利要求1-9任一所述的组合物共转染昆虫细胞，并培养所述昆虫细胞。

13.一种体外生长或产生重组腺相关病毒的方法，其特征在于：包括将权利要求4、5、6、7和9中任一所述的组合物共转染昆虫细胞，并培养所述昆虫细胞。