[发明专利]一种能够稳定传代的脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法

说明书

本发明提供了一种脊髓胶质瘤组织块，所述脊髓胶质瘤组织块的保藏编号为CGMCC No.23030，该脊髓胶质瘤组织块能够在动物体内稳定传代，维持亲代胶质瘤的遗传特征并反映人类患者群体的异质性和多样性，在药物开发和肿瘤学研究领域具有重要意义。

技术领域

本申请涉及生物医学领域，具体地，涉及一种能够稳定传代的脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法。

背景技术

肿瘤（tumour）是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物（neogrowth），因为这种新生物多呈占位性块状突起，也称赘生物（neoplasm）。研究发现，肿瘤细胞会出现不同于正常细胞的代谢变化，同时肿瘤细胞自身可通过糖酵解和氧化磷酸化（OXPHOS）之间的转换来适应代谢环境的改变。

脊髓胶质瘤是一种发生于椎管内髓内恶性肿瘤，与脑胶质瘤相比，其发病率较低，好发于青少年、有着独特的分子遗传特点。高级别脊髓胶质瘤从放化疗中获益有限，亟需依据脊髓星形细胞瘤自身特点来探索新的治疗方法。然而，脊髓胶质瘤尚没有可以开展基础实验研究的动物和细胞模型。建立可供研究脊髓胶质瘤生物学特征和治疗评估的动物脊髓胶质瘤模型显得尤为迫切。

因此，获得永生化、质量均一并且能够保留原肿瘤的生物学特性脊髓胶质瘤组织是实现临床治疗相关研究的基础和关键。

发明内容

本公开的目的在于提供一种能够稳定传代的脊髓胶质瘤组织块及其冻存和复苏方法，以解决现有技术中脊髓胶质瘤组织占比低、不易存活等导致不能对其充分探究等问题。

为了实现上述目的，本公开第一方面提供了一种分离的并且能够连续稳定传代培养的脊髓胶质瘤组织块，所述脊髓胶质瘤组织块的保藏编号为CGMCC No.23030。

根据本公开，其中，所述脊髓胶质瘤组织块能够在实验动物体内连续稳定地传代培养。

根据本公开，其中，所述实验动物为大鼠或小鼠，优选为NPG小鼠。

另一方面，本公开提供了上述脊髓胶质瘤组织块的冻存方法，该方法包括如下步骤：

S1、利用磷酸盐缓冲液清洗待冻存的脊髓胶质瘤组织；

S2、将清洗后的脊髓胶质瘤组织剪成组织块，并使用磷酸盐缓冲液再次冲洗所述组织块；

S3、向冲洗后的组织块中加入预冷的冻存液，重悬所述组织块，然后分装至冻存管中；

S4、将步骤S3获得的装有组织块的冻存管依次进行：3-5℃冷藏3-5h，15-25℃冷藏5-7h，零下70~零下90℃冷冻7-9h，最后在液氮中冷冻保存。

根据本公开，其中，所述预冷的冻存液包括含8-12体积%的二甲基亚砜的胎牛血清冻存液。

根据本公开，其中，步骤S3中所述预冷的冻存液的体积为所述组织块体积的10-20倍。

根据本公开，其中，所述组织块的长度为1-3mm，截面积为1-6mm²。

根据本公开，其中，步骤S3中所述预冷的冻存液包括含8-12体积%的二甲基亚砜的胎牛血清冻存液。

另一方面，本公开提供了第一方面所述脊髓胶质瘤组织块的复苏方法，其中，该方法包括：将利用上述冻存方法冻存得到的所述脊髓胶质瘤组织从液氮中取出，放置在35-38℃的水浴中解冻至融化，然后加入生理盐水混匀，再离心去掉上清液，得到复苏后的脊髓胶质瘤组织块。

另一方面，本公开提供了第一方面所述脊髓胶质瘤组织块在筛选治疗脊髓胶质瘤药物中的用途。