[发明专利]一种以葡萄糖为碳源合成2’-岩藻糖基乳糖的菌株及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种以葡萄糖为碳源合成2’-岩藻糖基乳糖的菌株，其特征在于，将重组质粒pACYCDuet-J23115-LacY和ptrc99a-ManCB-Gmdfcl-FucT共转化到大肠杆菌获得；

所述重组质粒pACYCDuet-J23115-LacY是将质粒pACYCDuet-1与LacY基因连接，并将质粒pACYCDuet-1中的T7启动子替换为J23115启动子；

所述重组质粒ptrc99a-ManCB-Gmdfcl-FucT是将质粒ptrc99a与ManCB基因簇、Gmdfcl基因簇、FucT基因、质粒ptrc99a的trc启动子、质粒ptrc99a的终止子连接后得到。

2.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述LacY基因的核苷酸序列如SEQ IDNo.1所示。

3.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述ManCB基因簇的核苷酸序列如SEQ IDNo.2所示；

所述Gmdfcl基因簇的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；

所述FucT基因的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；

所述质粒ptrc99a的trc启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；

所述质粒ptrc99a的终止子的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；

所述J23115启动子的核苷酸序列如SEQ ID No.45所示。

4.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述重组质粒pACYCDuet-J23115-LacY和ptrc99a-ManCB-Gmdfcl-FucT的质量比为1:1。

5.根据权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述大肠杆菌包括大肠杆菌JM109(DE3)。

6.权利要求1-5任一项所述的菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将质粒pACYCDuet-1经限制性内切酶NdeI和EcoRV双酶切，得到线性质粒；

2)将所述步骤1)得到的线性质粒与LacY基因连接，得到重组质粒pACYCDuet-LacY，以所述重组质粒pACYCDuet-LacY为模板，经PCR扩增，得到不含有T7启动子的基因序列；

3)将所述步骤2)不含有T7启动子的基因序列与J23115启动子经BsaI和T4DNA连接酶催化，得到重组质粒pACYCDuet-J23115-LacY；

4)将质粒ptrc99a与ManCB基因簇、Gmdfcl基因簇、FucT基因、质粒ptrc99a的trc启动子、质粒ptrc99a的终止子经BsaI和T4DNA连接酶催化，得到重组质粒ptrc99a-ManCB-Gmdfcl-FucT；

5)将所述步骤3)得到的重组质粒pACYCDuet-J23115-LacY与步骤4)得到的重组质粒ptrc99a-ManCB-Gmdfcl-FucT共转化到大肠杆菌中，得到菌株。

7.权利要求1-5任一项所述的菌株在以葡萄糖为碳源合成2’-岩藻糖基乳糖中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括：将所述菌株接种到发酵培养基中进行发酵，当发酵液的OD600为1时，加入终浓度为0.05-0.2mM IPTG和5g/L乳糖，继续发酵，得到2’-岩藻糖基乳糖。

9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述发酵培养基中葡萄糖的含量为15g/L。

10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述发酵的条件包括：发酵的温度为37℃，发酵的转速为220rpm；

所述继续发酵的条件包括：继续发酵的温度为25℃，继续发酵的转速为220rpm，继续发酵的时间为60h。