[发明专利]一种用于检测鰤诺卡氏菌的RPA引物、探针以及检测方法

权利要求书

1.一种用于检测鰤诺卡氏菌的RPA检测组合，其特征在于，所述检测组合包括RPA引物和探针；

所述RPA引物F和R的核酸序列分别如序列表SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示：

引物F：5’-CGCGGATGTGGGCCACAACGTCGAACGCCT-3’；

引物R：5’-GGAACCCGTGAAAATGCGAGTGATCAGTGG-3’；

所述探针根据所述的RPA引物设计得到，所述探针的大小为30~45bp，其5’端用FAM标记，3’端进行C3 Spacer修饰，且在探针中间距离5’端30bp处进行THF修饰；

所述探针的核酸序列如序列表SEQ ID NO.3所示：

探针P：5’-FAM-AGATTGCGAATCGCCAAGTGCTCGTCCGCA[FAM-dT][THF][BHQ-dT]CGAACGGGGTCGTAG(C3 Spacer)-3’。

2.一种基于RPA法检测鰤诺卡氏菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的用于检测鰤诺卡氏菌的RPA检测组合。

3.一种非疾病诊断的基于RPA法检测鰤诺卡氏菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）提取待测样品中的DNA；

2）以步骤1）所提取的DNA为扩增模板，采用如权利要求1所述的引物F和R、探针P在RPA反应管中进行RPA扩增反应；

3）分析RPA扩增反应得到的产物。

4.根据权利要求3所述的非疾病诊断的基于RPA法检测鰤诺卡氏菌的方法，其特征在于，步骤2）所述RPA扩增反应的条件为：95℃，30秒，40℃，30秒，40个循环，95℃，1分钟终止反应。