[发明专利]一种人工虎骨多肽及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 202210538600.8 | 申请日： | 2022-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN114874291A | 公开（公告）日： | 2022-08-09 |
| 发明（设计）人： | 吴曲笛;张泉龙;秦路平;刘玉玲;俞阳;刘燕;吴宣慧;田林坤 | 申请（专利权）人： | 浙江中医药大学 |
| 主分类号： | C07K7/08 | 分类号： | C07K7/08;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/20;C07K1/36;C07K1/14;A61K38/10;A61P19/10 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 邱启旺 |
| 地址： | 310053 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 人工 虎骨 多肽 及其 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种人工虎骨多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
2.一种权利要求1所述的一种人工虎骨多肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)取人工虎骨粉1g加入200ml的纯水中，80℃下水浴4h将其溶解，抽滤，取其溶解液。用3KD的超滤膜过滤，收集小于3KDa的多肽溶液，于-40℃真空冷冻干燥，得到多肽冻干粉末；
(2)采用Superdex TM peptide 10/300GL凝胶过滤分离，将步骤1所得多肽冻干粉末过SuperdexTM peptide 10/300GL凝胶柱进行分离纯化。流动相为含体积比0.1％三氟乙酸和30％乙腈的水溶液，流速为1mL/min,蛋白层析仪检测波长280nm，收集洗脱峰，-40℃真空冷冻干燥。
(3)高效液相色谱纯化，将步骤(2)中得到的多肽过反相高效液相柱，色谱柱为ZorbaxSB C18(250mm×9.4mm,5μm)；柱温为室温；流动相为乙腈和水，梯度洗脱：0～30min，乙腈浓度从0％变至95％，洗脱速度2.5～3.0mL/min,紫外检测波长为220nm，按峰收集组分，获得人工虎骨多肽。
3.一种权利要求1所述的一种人工虎骨多肽在制备促进成骨细胞增殖和抗骨质疏松方面的药物中应用。
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