[发明专利]聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法在审
| 申请号： | 202210538823.4 | 申请日： | 2022-05-17 |
| 公开（公告）号： | CN114965761A | 公开（公告）日： | 2022-08-30 |
| 发明（设计）人： | 王康;吴园园;黄俊龙;王梦格;廖冬;蔡雨蒙 | 申请（专利权）人： | 深圳赛保尔生物药业有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京精金石知识产权代理有限公司 11470 | 代理人： | 张黎 |
| 地址： | 518129 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 聚乙二醇 蛋白 药物 羟基 琥珀 亚胺 检测 方法 | ||
1.一种聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1样品制备：取聚乙二醇化蛋白药物反应液或各步骤纯化液作为样品溶液；
S2标准品制备：取100mgN-羟基琥珀酰亚胺，溶于10mL超纯水中，得10mg/mL的标准贮备液，将标准贮备液用磷酸盐缓冲液进行稀释，得标准品溶液；
S3取步骤S1得到的样品溶液和步骤S2得到的标准品溶液各10uL，分别注入高效液相色谱仪进行N-羟基琥珀酰亚胺残留量检测；所述色谱条件为：所述色谱柱为极性基团修饰的反相色谱柱，以磷酸盐缓冲液为流动相进行等度洗脱。
2.如权利要求1所述的聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中标准贮备液的稀释浓度为：将标准贮备液用磷酸盐缓冲液稀释到160μg/mL，80μg/mL，40μg/mL，20μg/mL，10μg/mL和5μg/mL。
3.如权利要求1所述的聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中的高效液相色谱仪为：品牌为thermo，型号为U3000的高效液相色谱仪，所述色谱柱为：品牌为Welch，型号为Ultimate Polar-RP，规格为4.6*300mm的色谱柱，流动相为：磷酸二氢钾溶液。
4.如权利要求3所述的聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法，其特征在于，所述色谱条件为：流速0.9～1.1mL/min，柱温为38～42℃，上样量10uL，采集时间30min，检测器为DAD检测器或紫外检测器，检测波长为255～265nm。
5.如权利要求4所述的聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法，其特征在于，所述色谱条件为：流速1.0mL/min，柱温为40℃，上样量10uL，采集时间30min，检测器为DAD检测器，检测波长为260nm。
6.如权利要求1所述的聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法，其特征在于，所述步骤S2和步骤S3中的磷酸盐缓冲液为20mmoL/L磷酸二氢钾溶液，pH 6.5±0.1。
7.如权利要求6所述的聚乙二醇化蛋白药物中N-羟基琥珀酰亚胺的检测方法，其特征在于，所述磷酸二氢钾溶液的制备方法为：称取磷酸二氢钾2.72g，加注射用水800mL溶解，并用氢氧化钠溶液调节至pH 6.5±0.1，加注射用水定容至1000mL，用0.22um膜过滤，即得。
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