[发明专利]一种下呼吸道样本处理试剂、诺卡菌检测试剂盒及核酸扩增方法

权利要求书

1.一种下呼吸道样本处理试剂，包括下呼吸道处理试剂，其特征在于，下呼吸道处理试剂的处理试剂配方为质量分数2％氢氧化钠、蒸馏水和体积分数60％异丙醇。

2.根据权利要求1所述的一种下呼吸道样本处理试剂，其特征在于，处理试剂配方每100mL的配比比例为：2g氢氧化钠、40mL蒸馏水和60mL异丙醇。

3.根据权利要求2所述的一种下呼吸道样本处理试剂，其特征在于，处理试剂配方每1000mL的配比比例为：20g氢氧化钠、400mL蒸馏水和600mL异丙醇。

4.根据权利要求4所述的一种下呼吸道样本处理试剂，其特征在于，处理试剂加入呼吸道标本，呼吸道标本分为痰和支气管肺泡灌洗液，加入比例计算方式为每x体积(mL)的痰放入2x体积(mL)的处理试剂，每x体积(mL)的支气管肺泡灌洗液放入2x体积(mL)的处理试剂。

5.一种核酸扩增方法，其特征在于，如上权利要求1-4任一所述的下呼吸道样本处理试剂，还包括以下步骤：

步骤一：将下呼吸道标本加入处理试剂，用振荡器震荡15s，室温静置15min，充分进行消化；

步骤二：取200μL步骤1中液体加入至核酸提取的提取试剂盒中；

步骤三：将提取试剂盒放入GP全自动快速核酸提取仪Nextrator48，选择程序Protocol1进行核酸提取；

步骤四：待提取结束后，将核酸产物用移液器吸出至1.5mL EP管中，并放4℃环境下存储箱中备用。

步骤五：按比例配制PCR反应液，并进行分装至PCR八连管，每管23μL。

步骤六：将2μL核酸产物加入至步骤五的PCR反应液中，在ABI-7500核酸扩增仪上设置如下程序进行核酸扩增反应。

步骤七：待PCR反应完成后，进行结果判读。

6.根据权利要求5所述的一种核酸扩增方法，其特征在于，步骤五中PCR反应液配方为Nocardia-F primer、Nocardia-R primer、Nocardia-Taqman probe、Globin-F primer、Globin-R primer、Globin-Taqman probe、ddH₂O和PCR master mix。

7.根据权利要求6所述的一种核酸扩增方法，其特征在于，步骤五中PCR反应液配比为0.8μL的Nocardia-F primer、0.8μL的Nocardia-R primer、0.4μL的Nocardia-Taqmanprobe、0.3μL的Globin-F primer、0.3μL的Globin-R primer、0.3μL的Globin-Taqmanprobe、7.6μL的ddH₂O和12.5μL的PCR master mix，总体积23μL，步骤五中PCR反应液中Nocardia-F primer、Nocardia-R primer、Nocardia-Taqman probe、Globin-F primer、Globin-R primer和Globin-Taqman probe的最终浓度为0.32μM、0.32μM、0.16μM、0.12μM、0.12μM和0.12μM。

8.根据权利要求5所述的一种核酸扩增方法，其特征在于，步骤七中结果判读方法为：Nocardia-Taqman probe为阴性，Globin-Taqman probe为阳性，则诺卡菌检测阴性；

Nocardia-Taqman probe为阳性，Globin-Taqman probe为阳性或阴性，则诺卡菌检测阳性；

Nocardia-Taqman probe与Globin-Taqman probe皆为阴性，结果无法确定，PCR反应抑制，需对提取核酸产物进行5倍稀释后重新进行试验。