[发明专利]一种下呼吸道样本处理试剂、诺卡菌检测试剂盒及核酸扩增方法

说明书

本发明公开了一种下呼吸道样本处理试剂、诺卡菌检测试剂盒及核酸扩增方法，涉及医疗领域。现提出如下方案，其包括下呼吸道样本处理试剂、核酸扩增方法及诺卡菌检测试剂盒。下呼吸道处理试剂，下呼吸道处理试剂的处理试剂配方为质量分数2％氢氧化钠、蒸馏水和体积分数60％异丙醇，PCR反应液配方为Nocardia‑F primer、Nocardia‑R primer、Nocardia‑Taqman probe、Globin‑F primer、Globin‑Rprimer、Globin‑Taqman probe、ddH₂O和PCR master mix；该产品对肺诺卡菌病进行诊断，可提高诺卡菌病确诊率，从而避免误诊误治，并且有效降低社会医疗费用支出。

技术领域

本发明涉及医疗领域，尤其涉及一种下呼吸道样本处理试剂、诺卡菌检测试剂盒及核酸扩增方法。

背景技术

诺卡菌主要引起人类肺部感染。然而，肺诺卡菌病和肺结核病临床症状和影像学表现难以区分。前者目前主要依赖于临床微生物实验室培养技术，但该方法灵敏度低，这在很大程度上制约了诺卡菌病的精确诊治。基于此，本项目拟开展研发一款以16S rRNA基因为靶点、高灵敏度和特异性的多重实时荧光PCR产品用于检测诺卡菌。本项目利用患者的痰和肺泡灌洗液展开回顾性研究，以16S rRNA基因扩增子测序为金标准，对前期设计的TaqMan-MGB探针和引物进行效能评估，以期为临床诊断肺诺卡菌病提供依据，为诺卡菌病的早期精准治疗提供帮助。

诺卡菌在环境中广泛存在，可感染免疫功能正常人群，其引起感染性疾病的诊断目前主要依赖于传统培养和染色技术，然而较低的灵敏度在很大程度上制约了诺卡菌病的准确诊断。有相当数量的诺卡菌病例被误诊为结核病，抗结核治疗不仅无法起到治疗效果，还会导致患者菌群失衡。伴随着诺卡菌病的发病率逐步升高，其与结核病的鉴别诊断越发重要，是临床的迫切需求。

所以，发展多重实时荧光PCR法检测诺卡菌不仅可满足临床鉴别诊断的需求，还可促进诺卡菌病的精准用药治疗，节约国家医疗资源。

发明内容

(一)发明目的

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种下呼吸道样本处理试剂、诺卡菌检测试剂盒及核酸扩增方法，以实现对肺诺卡菌病进行诊断，可提高诺卡菌病确诊率，从而避免误诊误治，并且有效降低社会医疗费用支出。

(二)技术方案

为达到上述技术目的，本发明提供了一种下呼吸道样本处理试剂，包括下呼吸道处理试剂，下呼吸道处理试剂的处理试剂配方为质量分数2％氢氧化钠、蒸馏水和体积分数60％异丙醇。

优选的，处理试剂配方每100mL的配比比例为：2g氢氧化钠、40mL蒸馏水和60mL异丙醇。

优选的，处理试剂配方每1000mL的配比比例为：20g氢氧化钠、400mL蒸馏水和600mL异丙醇。

优选的，处理试剂加入呼吸道标本，呼吸道标本分为痰和支气管肺泡灌洗液，加入比例计算方式为每x体积(mL)的痰放入2x体积(mL)的处理试剂，每x体积(mL)的支气管肺泡灌洗液放入2x体积(mL)的处理试剂。

优选的，如上权利要求1-4任一所述的下呼吸道样本处理试剂，还包括以下步骤：

步骤一：将下呼吸道标本加入处理试剂，用振荡器震荡15s，室温静置15min，充分进行消化；

步骤二：取200μL步骤1中液体加入至核酸提取的提取试剂盒中；

步骤三：将提取试剂盒放入GP全自动快速核酸提取仪Nextrator48，选择程序Protocol1进行核酸提取；

步骤四：待提取结束后，将核酸产物用移液器吸出至1.5mL EP管中，并放4℃环境下存储箱中备用。