[发明专利]一种文库标签引物的质控方法及其应用

权利要求书

1.一种文库标签引物的质控方法，其特征在于，该质控方法包括以下步骤：

制备待检质控品：以区别于检测对象物种的基因序列作为质控模板序列，对所述质控模板序列进行滑动切割，切割窗口长度为100-1000bp，步长为50±25bp，得到若干拆分序列，将若干所述拆分序列比对至病原数据库，去除可匹配病原数据库的拆分序列，剩余序列即为特异性模板序列，针对若干所述特异性模板序列进行引物设计，分别得到对应的特异性扩增引物对，以所述特异性扩增引物对对所述质控模板序列的标准品进行PCR扩增，纯化富集，得到待检质控品；

构建第一文库：将所述待检质控品和质检合格的文库标签引物进行PCR扩增，得到第一文库；

第一质控：将所述第一文库进行测序，对测序后待检质控品数据进行质控分析，筛选出符合质控指标的质控品，即为合格的质控品，形成质控品集合；

构建第二文库：将所述质控品集合与待检接头引物序列进行PCR扩增，得到第二文库，所述待检接头引物序列包括待检文库标签引物、测序接头；

第二质控：将所述第二文库进行测序，对测序后待检接头引物序列数据进行质控分析，筛选出符合质控指标的文库标签引物，即为合格的文库标签引物。

2.根据权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述第一质控还包括以下步骤：将质控分析不符合的质控品作为复检质控品，所述复检质控品重复进行所述构建第一文库步骤、所述第一质控步骤，筛选出合格的质控品。

3.根据权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述第二质控还包括以下步骤：将质控分析不符合的文库标签引物作为复检文库标签引物，所述复检文库标签引物重复进行所述构建第二文库步骤、所述第二质控步骤，筛选出合格的文库标签引物。

4.根据权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述构建第二文库步骤中，所述PCR扩增体系如下所示：

5.根据权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述构建第二文库步骤中，所述PCR扩增程序如下所示：

重复98℃10s，60℃30s，72℃30s的过程10个循环

72℃ 5min

4℃ ∞。

6.根据权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述引物设计的扩增子为100-600bp。

7.根据权利要求1所述的质控方法，其特征在于，所述质控模板序列选自：植源性核酸序列或噬菌体核酸序列。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的质控方法，其特征在于，所述质控指标包括：Cross_Contamination1/10⁶、实验产出数据量/预期数据量＞0.6、测序芯片数据拆分效率＞0.85和编号一致性。

9.权利要求1-8中任一项所述质控方法得到的质控品。

10.权利要求9所述的质控品在转座酶法文库标签引物质控中的用途。