[发明专利]ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法

权利要求书

1.ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、设计仓鼠ApoA5基因特异性打靶序列，制备cas9 mRNA和sgRNA；

步骤二、收集和培养仓鼠受精卵；

步骤三、显微注射：将所述sgRNA和cas9 mRNA共同注射至仓鼠受精卵的细胞质中；

步骤四、将显微注射后的受精卵植入代孕仓鼠体内，F0代仓鼠出生。

2.根据权利要求1所述的ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，在步骤一中，ApoA5基因特异性打靶序列为：GCAACCACTCAGGCGCGGAA。

3.根据权利要求1或2所述的ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，在步骤二中，交配17-20小时后取卵。

4.根据权利要求3所述的ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，在步骤二中，使用M2培养基作为取卵操作培养基。

5.根据权利要求4所述的ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，在步骤二中，受精卵培养采用HECM-10培养基，并在37℃，5％CO₂环境下培养。

6.根据权利要求1或2所述的ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，在步骤三中，通过T7启动子将设计的模板转录成sgRNA和Cas9一起进行显微注射。

7.根据权利要求6所述的ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，在步骤三中，原核注射片段为sgRNA和Cas9-mRNA。

8.根据权利要求1或2所述的ApoA5基因敲除仓鼠模型的构建方法，其特征在于，在步骤四中，代孕鼠麻醉后，打开腹腔找出卵巢输卵管，每只代孕鼠植入30枚注射后受精卵，通过输卵管伞口，吹入输卵管，缝合苏醒后，正常饲养。