[发明专利]一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种口蹄疫病毒纳米颗粒，其特征在于，所述口蹄疫病毒纳米颗粒是由FMDVVP1的GH-loop环肽、FMDV结构蛋白3A的T细胞表位、FMDV的3D的T细胞表位和Lumazine合酶中的两种或多种融合表达得到；

所述Lumazine合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述GH-loop环肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述FMDV的结构蛋白3A的T细胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；

所述FMDV的3D的T细胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根据权利要求1所述口蹄疫病毒纳米颗粒，其特征在于，包括FMDV VP1的GH-loop环肽、Lumazine合酶和以下0～1种多肽：FMDV结构蛋白3A的T细胞表位和FMDV 3D的T细胞表位。

3.根据权利要求2所述口蹄疫病毒纳米颗粒，其特征在于，包括LS-LOOP、3A-LS-LOOP、3D-LS-LOOP和LOOP-LS-3D；

所述LS-LOOP的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述3A-LS-LOOP氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；

所述3D-LS-LOOP的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示；

所述LOOP-LS-3D的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。

4.权利要求1～3任意一项所述口蹄疫病毒纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

人工合成带6His标签的LS-LOOP融合基因序列，或以所述LS-LOOP为模板设计引物分别扩增出均带有6His标签的3A-LS-LOOP、3D-LS-LOOP、LOOP-LS-3D融合基因片段；

将带6His标签的LS-LOOP、3A-LS-LOOP、3D-LS-LOOP或LOOP-LS-3D融合基因片段克隆至载体中，得到重组载体；

将所述重组载体转化入原核表达系统中表达，得到工程菌株；

将所述工程菌株进行培养，融合蛋白经表达和纯化，得到口蹄疫病毒纳米颗粒。

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，带有6His标签的3A-LS-LOOP融合基因片段的扩增用引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:16所示的3A-LS-LOOP-F1、核苷酸序列如SEQID NO:17所示的3A-LS-LOOP-F2、核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示的3A-LS-LOOP-F3和核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示的3A-LS-LOOP-R。

6.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，带有6His标签的3D-LS-LOOP融合基因片段的扩增用引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:20所示的3D-LS-LOOP-F1、核苷酸序列如SEQID NO:21所示的3D-LS-LOOP-F2和核苷酸序列如SEQ ID NO:22所示的3D-LS-LOOP-R。

7.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，带有6His标签的LOOP-LS-3D融合基因片段的扩增用引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示的loop-F、核苷酸序列如SEQ ID NO:24所示的LOOP-R、核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示的LS-3D-F、核苷酸序列如SEQ ID NO:26所示的F-OVER、核苷酸序列如SEQ ID NO:27所示的R-OVER、核苷酸序列如SEQ ID NO:28所示的LS-3D-R1、核苷酸序列如SEQ ID NO:29所示的LS-3D-R2、核苷酸序列如SEQ ID NO:30所示的LS-3D-R3。

8.一种口蹄疫病毒新型纳米颗粒疫苗，其特征在于，包括佐剂和权利要求1～3任意一项所述口蹄疫病毒纳米颗粒或权利要求4～7任意一项所述制备方法得到的口蹄疫病毒纳米颗粒。