[发明专利]一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。本发明将Lumazine合酶(LS)基因与口蹄疫结构蛋白VP1上GH‑loop环基因及3A或3D基因分别进行串联形成LS‑LOOP、3A‑LS‑LOOP、3D‑LS‑LOOP、LOOP‑LS‑3D编码基因，经原核表达系统表达获得纳米颗粒。将所述纳米颗粒作为免疫原与佐剂制成纳米颗粒疫苗免疫动物，LS‑LOOP、3A‑LS‑LOOP、3D‑LS‑LOOP可以有效激发体液及细胞免疫。本发明可利用LS体外自组装特性形成纳米颗粒，与当前市面上灭活疫苗相比具有生产成本低，产量高、制备简单、安全性更高等优点。

技术领域

本发明属于兽用疫苗技术领域，具体涉及一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法和应用。

背景技术

口蹄疫病毒(Foot and Mouth Disease Virus，FMDV)，隶属于小RNA病毒科(Picornaviridae)口疮病毒属(Aphthovirus)。FMDV为单股正链RNA病毒，无囊膜，形状呈球形，正二十面体对称，直径为20～30nm(Carroll A R et al 1984)。在口蹄疫病毒RNA基因组被衣壳蛋白包围，衣壳为60个壳粒组成，每个壳粒分别由四个结构蛋白VP1、VP2、VP3和VP4组成(Belsham G J et al 1993)。结构蛋白VP1、VP2及VP3表露在病毒表面，而VP4则在病毒衣壳内部(Forss S et al 1984)。口蹄疫病毒主要感染猪、牛、羊、骆驼等偶蹄动物。其分为7种不同的血清型，分别为O、A、C、Asia I和SAT 1、SAT 2、SAT 3，各型之间无交叉保护作用，这给该疫病的防控带来了巨大的挑战(谢庆阁2004)。

FMDV VP1的GH-loop环(141～160aa)是决定FMDV抗原性、诱导中和抗体和激发保护性免疫应答的主要B细胞抗原表位。FMDV的结构蛋白3A(21～35aa)可以诱导淋巴细胞增殖并与VP1 G-H环肽线性串联展示时协同诱导的nAb的潜力，有文献表明，3A(21～35aa)T细胞表位是新型、完全保护性肽疫苗的关键因素。另有文献表明，3D(55～70aa)蛋白可以在猪体内识别多个T细胞表位与3A(21～35aa)类似，可促进nAb滴度的诱导，并在免疫后3个月可检测到有效的IFN-γ反应。这些区域的合成肽可诱导实验动物产生针对FMDV的中和抗体，因此，对于FMDV的结构蛋白VP1及非结构蛋白3A(21-35aa)/3D(55-70aa)合成肽疫苗的研究成为当前研制新型口蹄疫疫苗的焦点。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种口蹄疫病毒纳米颗粒及其制备方法，具有较高的免疫原性，具备较强的抗体诱导能力，为后续口蹄疫病的防控提供基础。

本发明提供了一种口蹄疫病毒纳米颗粒，所述口蹄疫病毒纳米颗粒是由FMDV VP1的GH-loop环肽、FMDV结构蛋白3A的T细胞表位、FMDV的3D的T细胞表位和Lumazine合酶中的两种或多种融合表达得到；

所述Lumazine合酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述GH-loop环肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；

所述FMDV的结构蛋白3A的T细胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；

所述FMDV的3D的T细胞表位的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。

优选的，包括FMDV VP1的GH-loop环肽、Lumazine合酶和以下0～1种多肽：FMDV结构蛋白3A的T细胞表位和FMDV 3D的T细胞表位。

优选的，包括LS-LOOP、3A-LS-LOOP、3D-LS-LOOP和LOOP-LS-3D；

所述LS-LOOP的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；

所述3A-LS-LOOP氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示；