[发明专利]一种V8蛋白酶的制备方法有效
| 申请号： | 202210561954.4 | 申请日： | 2022-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN114921444B | 公开（公告）日： | 2023-10-10 |
| 发明（设计）人： | 王斌;张静静;安文琪;邢体坤;宋路萍 | 申请（专利权）人： | 晟明生物技术（郑州）有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/52 | 分类号： | C12N9/52;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C07K1/14;C07K1/22;C07K1/34;C07K1/36;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 李洋 |
| 地址： | 450046 河南省郑州市郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 v8 蛋白酶 制备 方法 | ||
1.PelB信号肽在如下A1)-A3)中任一种中的应用：
A1)制备V8蛋白酶或其融合蛋白；
A2)提高V8蛋白酶或其融合蛋白表达量或产量；
A3)制备V8蛋白酶检测产品；
所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。
2.与PelB信号肽相关的生物材料在如下A1)-A3)中任一种中的应用：
A1)制备V8蛋白酶或其融合蛋白；
A2)提高V8蛋白酶或其融合蛋白表达量或产量；
A3)制备V8蛋白酶检测产品；
所述与PelB信号肽相关的生物材料为所述PelB信号肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞系。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述编码基因为如下(a1)-(a3)中任一种：
(a1)SEQ ID No.5第7-69位所示的DNA分子；
(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求1中所述PelB信号肽的DNA分子；
(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有75％以上同一性且编码权利要求1中所述PelB信号肽的DNA分子。
4.融合蛋白，为将权利要求1中所述PelB信号肽融合于V8蛋白酶的N端后所得。
5.与权利要求4所述融合蛋白相关的生物材料，所述生物材料为权利要求4所述融合蛋白的编码基因或含有所述编码基因的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞系。
6.根据权利要求5所述的生物材料，其特征在于：所述编码基因为如下(b1)-(b3)中任一种：
(b1)SEQ ID No.5第7-867位所示的DNA分子；
(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码权利要求4所述融合蛋白的DNA分子；
(b3)与(b1)或(b2)限定的DNA序列具有75％以上同一性且编码权利要求4所述融合蛋白的DNA分子。
7.权利要求4所述的融合蛋白或权利要求5所述的生物材料在如下A1)-A3)中任一种中的应用：
A1)制备V8蛋白酶或其融合蛋白；
A2)提高V8蛋白酶或其融合蛋白表达量或产量；
A3)制备V8蛋白酶检测产品。
8.一种制备V8蛋白酶的方法，包括如下步骤：使权利要求4所述的融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述V8蛋白酶。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
1)将权利要求4所述融合蛋白的编码基因导入宿主菌，得到重组菌；
2)将所述重组菌进行诱导培养，得到诱导菌液；
3)从所述诱导菌液中提取周质空间蛋白，并从所述周质空间蛋白中纯化得到所述V8蛋白酶。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述诱导培养的方法包括如下步骤：培养所述重组菌至OD600nm值为0.6-1.0时，向培养体系中添加0.8-1.2mM的IPTG进行诱导培养。
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