[发明专利]一种V8蛋白酶的制备方法

说明书

本发明公开了一种V8蛋白酶的制备方法。所述方法包括如下步骤：使融合蛋白的编码基因在宿主菌或宿主细胞中进行表达，得到所述V8蛋白酶，所述融合蛋白为将PelB信号肽融合于V8蛋白酶的N端后所得；所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。本发明采用四种不同信号肽Sig、DsbA、PelB和STII制备V8蛋白酶，并通过对V8蛋白酶表达量进行分析发现：PelB信号肽可以高效引导V8蛋白酶分泌至周质空间，其表达量显著高于其它信号肽，是V8蛋白酶周质空间分泌表达的最佳信号肽，可用于V8蛋白酶制品的表达和制备工作。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种V8蛋白酶的制备方法。

背景技术

V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族，能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键，主要用于蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析。

V8蛋白酶来源于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，但该菌种具有很强的致病性，天然提取其限制使用。而且V8蛋白酶天然活性异源表达对宿主细胞产生毒性，表达量低。目前关于V8蛋白酶表达的报道较少。

发明内容

本发明的目的是提供一种V8蛋白酶的制备方法。

为了实现上述目的，本发明首先提供了PelB信号肽的新用途。

本发明提供了PelB信号肽在如下A1)-A3)中任一种中的应用：

A1)制备V8蛋白酶或其融合蛋白；

A2)提高V8蛋白酶或其融合蛋白表达量或产量；

A3)制备V8蛋白酶检测产品；

所述PelB信号肽的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示。

与所述PelB信号肽相关的生物材料在如下A1)-A3)中任一种中的应用也属于本发明的保护范围：

A1)制备V8蛋白酶或其融合蛋白；

A2)提高V8蛋白酶或其融合蛋白表达量或产量；

A3)制备V8蛋白酶检测产品；

与所述PelB信号肽相关的生物材料为所述PelB信号肽的编码基因或含有所述编码基因的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞系。

所述PelB信号肽的编码基因为如下(a1)-(a3)中任一种：

(a1)SEQ ID No.5第7-69位所示的DNA分子；

(a2)在严格条件下与(a1)限定的DNA分子杂交且编码上述PelB信号肽的DNA分子；

(a3)与(a1)或(a2)限定的DNA序列具有75％以上同一性且编码上述PelB信号肽的DNA分子。

为了实现上述目的，本发明又提供了一种融合蛋白。

本发明提供的融合蛋白为将上述PelB信号肽融合于V8蛋白酶的N端后所得。

与所述融合蛋白相关的生物材料也属于本发明的保护范围。

与所述融合蛋白相关的生物材料为所述融合蛋白的编码基因或含有所述编码基因的表达盒、重组载体、重组菌或重组细胞系。

所述融合蛋白的编码基因为如下(b1)-(b3)中任一种：

(b1)SEQ ID No.5第7-867位所示的DNA分子；

(b2)在严格条件下与(b1)限定的DNA分子杂交且编码上述融合蛋白的DNA分子；