[发明专利]一种RSH过表达基因工程淀粉酶产色链霉菌及提高丰加霉素发酵产量的方法

权利要求书

1. 一种RSH过表达基因工程淀粉酶产色链霉菌，其特征在于，其为通过基因工程方法由质粒pIB139和RSH基因构建重组质粒，并转入淀粉酶产色链霉菌Streptomycesdiastatochromogenes 1628中构建得到，所述RSH过表达基因工程淀粉酶产色链霉菌过量表达RSH基因，所述RSH基因序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种如权利要求1所述的RSH过表达基因工程淀粉酶产色链霉菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)以淀粉酶产色链霉菌为模板，PCR扩增获得含有NdeI和XbaI两个酶切位点的RSH基因；所述RSH基因序列为SEQ No.1；

2) 用NdeI和XbaI双酶切质粒pIB139，将扩增的目的基因片段用NdeI和XbaI双酶切后，与双酶切质粒pIB139进行连接；得到重组穿梭载体pIB139-RSH；转入大肠杆菌感受态细胞，筛选转化子保存；所述质粒pIB139是在pSET152质粒上，在多克隆位点添加红霉素启动子PermE*或者其他链霉菌内可用启动子构建获得；重组穿梭载体pIB139-RSH为大肠杆菌和链霉菌穿梭质粒；

3) 重组穿梭载体pIB139-RSH整合到淀粉酶产色链霉菌Streptomycesdiastatochromogenes 1628染色体基因组，获得RSH过表达基因工程淀粉酶产色链霉菌。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)中，PCR扩增的引物为RSH-F/RSH-D，RSH-F的序列如SEQ ID No.2所示，RSH-D的序列如SEQ ID No.3所示。

4.一种权利要求1所述的RSH过表达基因工程淀粉酶产色链霉菌在生产丰加霉素中的应用。

5.一种淀粉酶产色链霉菌高产丰加霉素的方法，其包括如下步骤：

1)将权利要求1所述的RSH过表达基因工程淀粉酶产色链霉菌接种在GYM培养基中，在25-37℃培养到产生分生孢子；

2)将孢子接种到GYM培养基培养基中，在25-37℃，150-200rpm，培养24-30小时，将培养好的种子转接到GYM培养基中发酵直到96h，即可获得丰加霉素母液。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述GYM培养基的组成为：葡萄糖 4g/L，酵母提取物 4g/L，麦芽糖提取物 4g/L，酪蛋白提取物 1g/L，NaCl 2g/L。