[发明专利]一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法

权利要求书

1.本发明涉及一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对该中药组合物中的莫诺苷、马钱苷和芒果苷三种成分进行含量测定，测定的色谱条件为：

第一步：色谱柱为C18柱，以乙腈为流动相A，以0.1%磷酸溶液（V/V）为流动相B，A+B=100%，进行梯度洗脱，洗脱程序为：0~30min，A7%，B93%，流速1.0ml/min； 30~60min，A7%→10%，B93%→90%，流速0.5ml/min；60~62min，A10%→90%，B90%→10%，流速1.0ml/min；62~72min， A90%，B10%，流速1.0ml/min；72~73min，A90%→7%，B10%→93%，流速1.0ml/min，检测波长为：莫诺苷、马钱苷的检测波长为240nm，芒果苷的检测波长为318nm；柱温为35℃，进样量10μl；

第二步：对照品溶液的制备：分别精密称取莫诺苷、马钱苷、芒果苷对照品适量，加80%甲醇制成每1mL含莫诺苷100μg、马钱苷130μg、芒果苷48μg的混合对照品溶液；

第三步：供试品溶液制备：取该中药组合物，研细，取1.0g，精密称定，精密加入80%甲醇溶液25mL，称定重量，超声处理（功率250W，频率20kHz）20分钟，取出，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

第四步：分别制备缺山萸肉药材的制剂、缺知母药材的制剂，再根据第三步分别制备缺山萸肉阴性对照溶液；缺知母阴性对照溶液；

第五步：方法学考察，所述方法学考察包括线性关系考察、专属性试验、精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收试验、耐用性试验，所述线性关系考察中的对照品溶液为：精密称取莫诺苷、马钱苷对照品适量，分别置于不同的25mL量瓶中，加80%甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.6mg/mL的莫诺苷对照品储备液和浓度为0.6mg/mL的马钱苷对照品储备液；精密称取芒果苷对照品适量，置于25mL量瓶中，加稀乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.6mg/mL的芒果苷对照品储备液；分别精密吸取上述对照品储备液适量置于10mL量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别制成35.70、52.29、79.53、106.04、132.56、159.70μg/mL莫诺苷系列浓度溶液；43.14、64.39、96.10、128.14、160.17、192.98μg/mL马钱苷系列浓度溶液和16.46、24.57、36.67、48.90、61.12、73.64μg/mL芒果苷系列浓度溶液，各进样10μL，以各对照品的浓度为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，进行线性回归。

2.根据权利要求1所述的一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法，其特征在于：所述专属性试验为分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl进样，记录色谱图。

3.根据权利要求1所述的一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法，其特征在于：所述精密度试验为精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，分别在所述第一步中的色谱条件下连续进样6次，测定莫诺苷、马钱苷、芒果苷的峰面积的RSD值。

4.根据权利要求1所述的一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法，其特征在于：所述稳定性试验为精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液，每隔一定时间测定峰面积，考察了24h内的稳定性，测莫诺苷、马钱苷、芒果苷的峰面积的RSD值。

5.根据权利要求1所述的一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法，其特征在于：所述重复性实验为精密称取以高、中、低剂量9份样品，分别按所述第二步中的方法制备供试品溶液，按所属第一步中的色谱条件进样测定。

6.根据权利要求1所述的一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法，其特征在于：所述加样回收试验为精密称取已知含量的同一批样品9份，按高、中、低比例精密加入一定量的对照品，按所述第三步中的方法制备供试品溶液，按所属第一步中的色谱条件进样测定。

7.根据权利要求1所述的一种中药组合物的一测三评快速定量检测方法，其特征在于：所述耐用性试验为考察了同一品牌不同批号的色谱柱对检测结果的影响。