[发明专利]一种单抗克隆与表达载体的构建及应用

权利要求书

1.一种单抗克隆与表达载体的构建，其特征在于，步骤如下：

(1)将leader序列插入pCDNA3.1-myc-His载体的HindIII和EcoRI酶切位点，与pCDNA3.1-myc-His载体的CMV启动子序列构成C片段，重组载体命名为pCDNA-C；

(2)将抗体重链恒定区基因序列C_H、轻链k链恒定区DNA序列C_k和轻链λ链的恒定区DNA序列C_λ，分别插入pCDNA-C重组载体的XhoI和Agel酶切位点，与pCDNA3.1-myc-His载体的牛生长激素PolyA信号序列分别构成H片段、K片段和L片段，完成构建，获得重组载体，分别命名为pCDNA-C-H、pCDNA-C-K和pCDNA-C-L，即为单抗克隆与表达载体，重组载体分别含有C片段和H片段、C片段和K片段、C片段和L片段。

2.根据权利要求1所述的单抗克隆与表达载体的构建，其特征在于，所述的步骤(1)中，leader序列为：

AAGCCTGGGCCACCATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTGCTGCTCCTCTGGGTTCCAGGTGAGGGTACAGATAAGTGTTATGAGCAACCTCTGTGGCCATTCTGATGCTCCATGCCTCTCTGTTCTTGATCACTATAATTAGGGCATTTGTCACTGGTTTTAAGTTTCCCCAGTCCCCTGAATTTTCCATTTTCTCAGAGTGATGTCCAAAATTATTCTTAAAAATTTAAATGGAAAGGTCCTCTGCTGTGAAGGCTTTTAAACAAAATAATCTTTGTGTTTTTCATTCCAGGTTCCACTGGTGAC。

3.根据权利要求1所述的单抗克隆与表达载体的构建，其特征在于，所述的步骤(1)中，pCDNA3.1-myc-His载体的酶切位点包括为HindIII酶切位点和EcoRI酶切位点、XhoI酶切位点和Agel酶切位点。

4.权利要求1所述的上述单抗克隆与表达载体的应用，其特征在于，包括以下步骤：

(1)以pCDNA-C-H载体为模版，进行一次PCR反应，扩增获得含有C片段和H片段的第一载体线性DNA，所述的C片段和H片段分别位于载体线性DNA的两端；

(2)以pCDNA-C-K载体为模版，进行一次PCR反应，扩增获得含有C片段和K片段的第二载体线性DNA，所述的C片段和K片段分别位于载体线性DNA的两端；

(3)以pCDNA-C-L载体为模版，进行一次PCR反应，扩增获得含有C片段和L片段的第三载体线性DNA，所述的C和L片段分别位于载体线性DNA的两端；

(4)将第一载体线性DNA、第二载体线性DNA和第三载体线性DAN分别与抗体V片段混合，经PCR反应扩增，分别获得抗体线性表达盒；

(5)筛选到高活性抗体，需要构建质粒表达载体时，直接将步骤(1)-(3)获得的第一载体线性DNA、第二载体线性DNA及第三载体线性DNA与步骤(4)的V片段混合，利用无缝连接技术，构建抗体重链、轻链k链或轻链λ链质粒表达载体，获得全长抗体分子质粒表达载体，进行抗体表达。