[发明专利]一种快速获取大鲵原代性腺细胞的方法有效
| 申请号： | 202210568315.0 | 申请日： | 2022-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN114736847B | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 胡乔木;连子童;夏雪平;田海峰;李忠;肖汉兵 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院长江水产研究所 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 李鹏 |
| 地址： | 430223 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 获取 大鲵 性腺 细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种大鲵原代性腺细胞分离和转染的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）麻醉后处死大鲵，大鲵体表消毒，取出性腺组织放置于双抗PBS溶液中备用；
（2）用双抗PBS溶液冲洗性腺至缓冲液清澈无明显浑浊，用完全培养基冲洗性腺；
（3）将性腺剪碎，吸取剪碎的组织块于细胞筛上，研磨性腺组织块使其通过细胞筛成为单细胞，使用完全培养基将单细胞冲洗下来即得原代性腺细胞；
（4）将得到的大鲵原代性腺细胞分置于细胞培养板中，27℃，贴壁培养6-12小时，吸取上层培养基，离心弃上清，收集下层细胞，使用opti-MEM培养基重悬细胞，同时将细胞培养板中的完全培养基更换为opti-MEM培养基，然后进行转染实验；
所述双抗PBS溶液为含10%双抗的PBS溶液，所述完全培养基为：含10%双抗、10%胎牛血清的DMEM高糖培养基，所述性腺剪碎至组织块大小为1 mm3~2 mm3，所述细胞筛的孔径为70μm，所述大鲵为一龄的中国大鲵且来源于养殖基地。
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