[发明专利]脱鳞病毒检测体系、引物、探针及方法

权利要求书

1.引物，其特征在于，包括用于特异性扩增脱鳞病毒的上游引物57-F和下游引物57-R，所述上游引物57-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述下游引物57-R的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.探针，其特征在于，包括用于特异性检测脱鳞病毒的探针57-P，所述探针57-P的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

3.脱鳞病毒检测体系，其特征在于，包括ddPCR探针法预混液，所述ddPCR探针法预混液包括如权利要求1所述引物和/或权利要求2所述探针。

4.根据权利要求3所述脱鳞病毒检测体系，其特征在于，所述ddPCR探针法预混液还包括DNA聚合酶和/或无RNA酶蒸馏水。

5.根据权利要求4所述脱鳞病毒检测体系，其特征在于，所述ddPCR探针法预混液还包括DNA聚合酶和无RNA酶蒸馏水，所述ddPCR探针法预混液的总体积为29μL，包括：15μL 2倍浓度的Probe dPCR SuperMix、2.4μL浓度为10μM的上游引物57-F、2.4μL浓度为10μM的下游引物57-R、0.75μL浓度为10μM的探针57-P、8.45μL无RNA酶蒸馏水。

6.根据权利要求3所述脱鳞病毒检测体系，其特征在于，还包括探针法ddPCR微滴生成油、ddPCR微滴检测油、阴性对照、阳性对照或无RNA酶蒸馏水中的至少一种。

7.根据权利要求6所述脱鳞病毒检测体系，其特征在于，所述脱鳞病毒检测体系包括阳性对照，所述阳性对照为含有脱鳞病毒基因序列的质粒。

8.权利要求1所述引物、权利要求2所述探针或权利要求3至7任一项所述脱鳞病毒检测体系在非诊疗为目的检测脱鳞病毒中的应用。

9.脱鳞病毒的检测方法，其特征在于，包括步骤：

制备PCR反应模板：提取待测样品的DNA，作为PCR反应模板；

配制ddPCR反应液：ddPCR探针法预混液29μL，PCR反应模板1μL；

制备微滴：将8联排管放入微滴制备仪相对应位置，将微液滴生成芯片放入配套的生成芯片卡具中，压下卡具固定芯片，在水孔中加入ddPCR反应液30μL，在油孔中加入180μL微液滴生成油，然后将芯片的水孔和油孔盖上微液滴生成芯片密封垫，将装有微液滴生成芯片的卡具放入仪器，压下把手固定，操作仪器运行，生成微液滴；

扩增：取出卡具，将含有微液滴的8联排管盖上密封盖，转入PCR仪中进行扩增；

检测：将完成PCR扩增的微液滴8联管和微液滴检测芯片分别放入检测芯片机械卡具相对应位置，压下卡具上盖固定芯片，在油孔1和油孔2中分别加入430μL和500μL微液滴检测油，盖上微滴检测芯片密封垫，然后将卡具放入生物芯片分析仪中，使用微滴分析仪检测微滴进行读数，分析每管反应体系中发出荧光的微滴数，显示样品中脱鳞病毒检测结果。

10.根据权利要求9所述检测方法，其特征在于，所述扩增步骤中，所述扩增的程序为95℃预变性10分钟；94℃变性30秒，63℃退火60秒，共40个循环；4℃恒温，结束反应，每步都设置1.5℃/秒的变温速度。