[发明专利]一种四苯乙烯基苯并咪唑类荧光探针及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种四苯乙烯基苯并咪唑类荧光探针及其制备方法和应用，所述荧光探针具有式（Ⅰ）所示结构，其制备过程如下：（1）将1，2‑二甲基苯并咪唑和（3‑溴丙基）二甲基溴化铵加入到乙腈中，加热回流，待反应完成后，分离得到化合物A；（2）将化合物A和1，1，2‑三苯基‑2‑(4‑甲醛基苯)乙烯在N,N‑二甲基甲酰胺中加热回流，分离纯化后得到式（Ⅰ）所示结构的荧光探针。本发明荧光探针具有合成简单、灵敏度高、选择性好、响应速率快、稳定性强等优点。其能够准确测定血清白蛋白的浓度，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种四苯乙烯基苯并咪唑类荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

人血清白蛋白(HSA,Human Serum Albumin)是一种心形单链蛋白，由585个氨基酸组成，分子量约为66.5kDa,是血浆中含量最丰富的蛋白质，占血浆蛋白总量的50％以上。HSA在肝细胞合成后，经粗面内质网加工后，转运至高尔基体修饰，然后形成成熟的白蛋白并释放到血液中。HSA具有强大的配体结合能力，是诸多内源性物质和外源性药物(如激素、脂肪酸、药物和其他生物活性小分子)的主要转运蛋白。此外，HSA在维持血浆胶体渗透压，清除自由基，抑制血小板聚集，参与免疫调节等生理过程中也发挥着重要功能。

在人体代谢正常情况下，血液中HSA的含量维持在35-50g/L，由于肾脏的过滤作用，尿液中HSA浓度通常低于30mg/L。HSA水平异常能够反映出人体内某些生理指标的异常，如血浆中低水平的HSA，可能是由类风湿性关节炎、肝功能衰竭、肝硬化和慢性肝炎引起的；尿液中高水平的HSA，则可能与慢性肾脏疾病、急性肾炎、糖尿病肾小球硬化、肾功能衰竭等疾病相关。因此，HSA在血清和尿液中的含量是监测人体健康状态及早期诊断相关疾病的重要指标。

目前，检测HSA的方法主要有：基于染料结合的比色方法、基于抗体的免疫化学方法和基于LC-MS/MS的蛋白质组学方法。其中，染料结合法和免疫化学法是临床检测HSA的主要方法。染料结合法大多选用溴甲酚绿(BCG)和溴甲酚紫(BCP)作为显色剂。BCG对HSA高度敏感，但特异性差，特别是在白蛋白含量较低和球蛋白含量较高的情况下，BCG也可与球蛋白结合，导致HSA的含量被高估；BCP对HSA的特异性好，但在需要血液透析和腹膜透析患者的血清中，BCP法测得的HSA含量偏低。免疫化学法虽然特异性强，但耗时长、操作繁琐、成本较高，限制了其在HSA检测中的应用。蛋白质组学方法对操作人员专业技能要求高、成本高昂、耗时长，不适用于HSA的快速检测。

相对于以上检测方法，基于分子探针技术的荧光分析法具有灵敏度高、选择性好、响应速率快、实时监测、操作简单、成本低廉等优势，受到研究者的广泛关注。近年来，研究者虽然报道了数量众多的HSA荧光探针，但普遍存在以下缺陷：探针分子主要结合在HSA分子的药物位点上，由于多种内源性物质和外源性药物也结合在此处，探针与共存物存在竞争效应，抗干扰性差；不能有效区分HSA和BSA。

发明内容

本发明的目的是提供一种四苯乙烯基苯并咪唑类荧光探针及其制备方法和应用，以解决现有HSA荧光探针的合成困难、灵敏度低、选择性差等问题。

本发明为实现其目的采用的技术方案是：一种四苯乙烯基苯并咪唑类荧光探针(简称TPNN)，其具有式(Ⅰ)所示结构：

一种上述荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

(1)将1，2-二甲基苯并咪唑和(3-溴丙基)二甲基溴化铵加入到乙腈中，加热回流，待反应完成后，分离得到化合物A：

(2)将化合物A和1,1,2-三苯基-2-(4-甲醛基苯)乙烯在N,N-二甲基甲酰胺中加热回流，分离纯化后得到式(Ⅰ)所示结构的荧光探针。

步骤(1)中，1，2-二甲基苯并咪唑和(3-溴丙基)二甲基溴化铵的摩尔比为1/1-1.5/1。