[发明专利]一种驴肉中脂质组成的分析方法

权利要求书

1.一种驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样品脂质提取：

取一定量驴肉样品加入氯仿-甲醇混合溶液中进行高通量组织研磨；然后将研磨后的样品进行冰上提取，提取的同时进行涡旋振荡；提取后进行离心，并将所得上清液浓缩至干，然后溶解于适量异丙醇中，用滤膜过滤后冷冻储藏；

（2）样品测试：

采用高效液相色谱-质谱串联对步骤（1）得到的冷冻储藏样品进行分析；

（3）数据分析：

利用脂质结构数据库对步骤（2）所得原始脂质数据进行注释；利用Xcalibur软件对注释脂质进行归一化处理；

再利用GraphPad Prism 8对数据分析，分析脂质组成。

2.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：步骤（1）所述氯仿-甲醇混合溶液中氯仿和甲醇的体积比为2:1。

3.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：步骤（1）所述滤膜的孔径为0.22 μm。

4.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：步骤（1）所述驴肉样品与氯仿-甲醇混合溶液用量的质量体积比为2mg:15μL。

5.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：步骤（1）所述高通量组织研磨为在高通量组织研磨仪中于60 Hz研磨120秒；所述冰上提取进行2 h，同时每30min涡旋振荡30 s；所述离心为：在4℃条件下以10000×g离心15 min。

6.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：步骤（2）中液相色谱的条件为：

C18色谱柱，2.1 mm×100 mm，1.7 µm；

自动进样器温度8 ℃；柱温55 ℃；

流动相A：乙腈-水，体积比40:60，含10 mmol/L甲酸铵；

流动相B：异丙醇-乙腈，体积比90:10，含10 mmol/L甲酸铵；

流速0.30 mL/min；

梯度洗脱程序：0～1.5 min，60% A、40% B；1.5～10.5 min，60%～15% A、40%～85% B；10.5～14 min，15% A、85% B；14～14.1 min，15%～0% A、85%～100% B；14.1～15 min，0%A、100% B；15～15.2 min，0%～60% A、100%～40% B；15.2～18 min，60% A、40% B。

7.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：步骤（2）中质谱的条件为：

电喷雾离子源；

正模式进样体积2 μL，负模式进样体积6 μL；

离子源雾化气压力50 psi；

辅助气压力50 psi，气帘气压力30 psi，离子源温度600 ℃，正、负模式电压分别为5000 V和-4500 V；

去簇电位100 V；

每个采集周期包括一个快速飞行时间质谱扫描200 ms，然后连续采集11 个子离子扫描，每个50 ms；

TOF MS扫描质量范围为200～2000 Da，碰撞能量10 eV；

子离子扫描范围100～2000 Da，碰撞能量20-70 eV。

8.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：在步骤（3）之后还包括以下步骤：

然后利用Metabo Analyst软件对数据进行主成分和正交偏最小二乘判别分析。

9.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：在步骤（3）之后还依次包括以下步骤：

然后利用Metabo Analyst软件对数据进行主成分和正交偏最小二乘判别分析；

利用SAS软件进行单因素方差分析和Tukey检验分析，依据第一主成分投影中具有可变重要性1和P0.05，筛选差异脂质。

10.根据权利要求1所述驴肉中脂质组成的分析方法，其特征在于：在步骤（3）之后还依次包括以下步骤：

然后利用Metabo Analyst软件对数据进行主成分和正交偏最小二乘判别分析；

利用SAS软件进行单因素方差分析和Tukey检验分析，依据第一主成分投影中具有可变重要性1和P0.05，筛选差异脂质；

采用接收者操作特征曲线筛选潜在脂质标志物；

通过在线KEGG路径数据库，将差异脂质进行功能富集。