[发明专利]一种驴肉中脂质组成的分析方法

说明书

本发明提供一种驴肉中脂质组成的分析方法，对驴肉样品进行总脂提取，对脂质分子进行分离、鉴定和分析。本发明通过氯仿‑甲醇法提取驴肉中的总脂，采用液相色谱‑质谱法的驴肉脂质组学分析方法，获得驴肉样品数据进行脂质注释和归一化处理、多元统计分析、差异脂质筛选和富集，为驴肉的鉴定提供脂质标记物，为驴肉脂质成分分析、产地溯源和品种选育提供技术支持。

技术领域

本发明属于驴肉组成检测分析领域，具体涉及一种驴肉中脂质组成的分析方法。

背景技术

驴是重要的经济家畜，为人类提供皮、奶和肉类。驴肉因其独特的风味特征、低热量、高蛋白质和富含多种不饱和脂肪酸等特点，已成为绿色、健康优质肉类的代表，深受广大消费者喜爱，具有较高的开发和利用价值。驴产业是我国特色产业，对于优化畜牧业结构、丰富畜产品种类具有重要作用。

肌内脂肪是影响肉品质（“雪花肉”）的重要因素，与肉的风味、多汁性和嫩度直接相关，而风味是决定驴肉品质的重要因子。驴肉加工过程中富含的多不饱和脂肪酸氧化降解形成的挥发性风味物质是构成驴肉风味特征的重要成分。驴肉中肌内脂肪含量和脂肪酸组成已清晰，且肌内脂肪与驴肉品质密切相关。但驴肉中脂质特质性成分不明，品质评价技术匮乏，亟待开发一种扫描速度快、分辨率高、分析通量高、高特异和灵敏性的脂质组成分析方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种驴肉中脂质组成的分析方法，可对驴肉进行脂质组学分析，对驴肉进行总脂提取，对脂质分子进行快速分离、鉴定和分析。

为了达到上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种驴肉中脂质组成的分析方法，包括以下步骤：

（1）样品脂质提取：

取一定量驴肉样品加入氯仿-甲醇混合溶液（2:1，V/V）中进行高通量组织研磨；然后将研磨后的样品进行冰上提取，提取的同时进行涡旋振荡；提取后进行离心，并将所得上清液浓缩（真空）至干，然后溶解于适量异丙醇中，用滤膜（0.22 μm）过滤后冷冻储藏（-20℃）。

优选的，所述驴肉样品与氯仿-甲醇混合溶液用量的质量体积比为2mg:15 μL；所述高通量组织研磨为在高通量组织研磨仪中于60 Hz研磨120秒；所述冰上提取进行2 h，同时每30 min涡旋振荡30 s；所述离心为：在4℃条件下以10000×g离心15 min。

（2）样品测试：

采用高效液相色谱-质谱串联对步骤（1）得到的冷冻储藏样品进行分析；

液相色谱条件为：

C18色谱柱（2.1 mm×100 mm，1.7 µm）；

自动进样器温度8 ℃；柱温55 ℃；

流动相A：乙腈-水（40:60，V/V，含10 mmol/L甲酸铵）；

流动相B：异丙醇-乙腈（90:10，V/V，含10 mmol/L甲酸铵）；

流速0.30 mL/min；

梯度洗脱程序：0～1.5 min，60% A、40% B；1.5～10.5 min，60%～15% A、40%～85%B；10.5～14 min，15% A、85% B；14～14.1 min，15%～0% A、85%～100% B；14.1～15 min，0%A、100% B；15～15.2 min，0%～60% A、100%～40% B；15.2～18 min，60% A、40% B。

质谱条件为：

电喷雾离子源；

正模式进样体积2 μL，负模式进样体积6 μL；

离子源雾化气压力50 psi；

辅助气压力50 psi，气帘气压力30 psi，离子源温度600 ℃，正、负模式电压分别为5000 V和-4500 V；