[发明专利]HPLC法测定白扁豆中葫芦巴碱的含量的方法

说明书

本发明公开了HPLC法测定白扁豆中葫芦巴碱的含量的方法，属于植物提取检测技术领域，包括配制供试品溶液、对照品溶液和空白对照溶液，确定HPLC的色谱条件，进行专属性试验，考察线性关系，进行精密度试验和重复性试验，进行稳定性考察，进行白扁豆中葫芦巴碱的加样回收试验和耐用性试验和对不同批次白扁豆中的葫芦巴碱进行含量测定；通过多种试验，确定了本方法供试品制备方法及色谱系统，并在确定的色谱条件下进行检测分析，结果表明葫芦巴碱分离度和峰形较好、理论塔板数也较高；该方法专属性强，容易操作、准确性良好，可作为白扁豆中葫芦巴碱含量测定的方法，为白扁豆的进一步的质量控制与开发利用提供参考。

技术领域

本发明属于植物提取检测技术领域，具体涉及HPLC法测定白扁豆中葫芦巴碱的含量的方法。

背景技术

白扁豆是豆科植物扁豆的干燥成熟的种子，为一种临床中常用的中药，具有健脾化湿，和中消暑的功效。白扁豆中主要含有脂肪、多糖、蛋白质、矿物质、维生素、甾体及皂苷类等物质，目前文献对白扁豆的研究主要集中在氨基酸和皂苷类成分，目前尚未见到采用HPLC法测定白扁豆中葫芦巴碱的含量的测定方法，为了完善白扁豆质量标准和为有效控制白扁豆质量提供依据，所以需要建立一种HPLC法测定白扁豆中葫芦巴碱含量的测定方法。

发明内容

本发明的目的在于提供HPLC法测定白扁豆中葫芦巴碱的含量的方法，以解决背景技术中的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

HPLC法测定白扁豆中葫芦巴碱的含量的方法，包括如下步骤：

步骤一：将白扁豆粉碎，过三号筛得到白扁豆粉末，将白扁豆粉末加入烧瓶中，然后加入质量分数为50％的甲醇溶液，称量并记录质量，在功率为300W，频率为40kHz的条件下超声处理30min，冷却后用质量分数为50％的甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，过滤，取续滤液得到供试品溶液；配制对照品溶液，准备空白对照溶液；

步骤二：确定HPLC的色谱条件，具体如下：

色谱柱内径为4.6mm，长度为250mm，填料颗粒直径为5μm；流动相为乙腈-水(乙腈和水的体积比为77:23)；流速为1.0mg/mL；上样量为10μL；柱温为25℃；检测波长为264nm。

步骤三：吸取空白对照溶液、对照品溶液和供试品溶液，按照步骤二中的色谱条件进行专属性试验；

步骤四：分别吸取不同浓度的对照品溶液，分别为0.0005mg/mL、0.0025mg/mL、0.0051mg/mL、0.0505mg/mL、0.2524mg/mL和0.5047mg/mL，分别按照步骤二中的色谱条件测定峰面积，考察线性关系；

步骤五：取6份供试品溶液，按照步骤二中的色谱条件，进行精密度试验，考察中间精密度和重现性；

步骤六：吸取0.0505mg/mL的对照品溶液和供试品溶液，按照步骤二中的色谱条件，分别于配制后0h、2h、4h、8h、12h和24h进行检测，考察其稳定性；

步骤七：取6份供试品溶液，按照步骤二中的色谱条件，进行重复性试验；

步骤八：进行白扁豆中葫芦巴碱的加样回收试验和耐用性试验，对不同批次白扁豆中的葫芦巴碱进行含量测定。

进一步地，供试品溶液中白扁豆粉末和质量分数为50％的甲醇溶液的用量比为0.6g：25mL。

进一步地，对照品溶液的制备方法为：按照50μg：1mL的用量比将葫芦巴碱对照品与质量分数为50％的甲醇溶液混合，制备出浓度为0.0505mg/mL的对照品溶液。

进一步地，空白对照溶液为质量分数为50％的甲醇溶液。

进一步地，HPLC的理论塔板数按葫芦巴碱峰计算≥1000。