[发明专利]检测男性不孕不育的基因文库的构建方法和试剂盒

说明书

本发明涉及一种检测男性不孕不育的二代测序基因文库的构建方法和试剂盒。所述构建方法包括：获取样本的基因组DNA；对所述基因组DNA中的男性不孕不育基因进行扩增，构建检测男性不孕不育基因的文库；所述男性不孕不育基因选自123个基因中的一种或者多种。本发明能针对男性不孕不育的一个或者多个基因进行扩增并构建检测文库，该文库能够用于二代测序，实现二代测序在男性不孕不育基因检测中的应用，采用二代测序对男性不孕不育基因进行检测，优点包括：(1)通量高；(2)成本低；(3)效率高；(4)测序深度高。

技术领域

本发明涉及基因检测领域，特别涉及一种检测男性不孕不育的基因文库的构建方法和试剂盒。

背景技术

男性不育是指夫妻双方在无保护性措施的同居下一年及以上，无法使女方自然受孕。男性不育患者主要表现为：梗阻性无精子症(临床表现为精液常规检查未见精子，附睾穿刺/睾丸组织活检可见精子)，非梗阻性无精子症/严重少精子症(临床表现为精液常规检查未见精子，附睾穿刺/睾丸组织活检未见精子，或者精子数量极度减少等)，和弱/畸形精子症(临床表现为精子数量减少、精子运动能力下降或精子形态畸形)。

虽然小部分患者可通过体外受精的辅助生殖技术，产生后代，但其成功率一直是生殖医学领域的一个难题，且当前的辅助生殖技术助孕流程复杂以及成本高昂，这给患者带来巨大的心里压力和经济负担。另一方面，目前大多数患者的病因不明，通过辅助生殖技术出生孩子是否将来仍有不育的风险一直让人担忧。

明确男性不育的病因对于医学基础研究及临床治疗均有重要意义。男性不育的病因复杂，由于男性生殖系统的特殊环境，遗传缺陷被认为可能是主要病因，并有高度的遗传异质性。已往的研究揭示，参与精子发生的基因有数千个，其中超过800个基因被敲除后，在模式动物中显示出雄性不育的表型。但在人类，男性不育的遗传病因学研究处于起步阶段，参与精子发生的基因多达2000多个，但明确的男性不育致病基因仅仅才100多个，大量未知的男性不育致病基因有待发现和阐明其致病机制。不同的致病基因导致的临床表型和助孕结局也不一样。因此，在临床上明确男性不育患者的遗传学因素对于助孕治疗方案的选择具有重要意义。目前已经被发现的与男性无精子症和严重少精子症相关的基因，包括MEIOB、MEI1、SPO11、TEX14、TEX11、TEX15、TDRD9、TDRD7、SYCE1、ZMYND15和C11orf80等；弱畸形精子症(精子变形和尾部鞭毛组装)的致病基因，包括DPY19L2、ZPBP、PICK1、SPATA16、SUN5、BRDT、TSGA10、AKAP3、AKAP4、DNAH1、CFAP43、CFAP44、DNAH11、DNAH5、SPAG1、CFAP47、CFAP58、CFAP65、CFAP69、CFAP70、CFAP91、CFAP251、DNAH2、DNAH6、DNAH8、DNAH10、DNAH17、AK7、ARMC2、CEP135、DZIP1、FSIP2、QRICH2、SPEF2、TTC29、TTC21A和WDR63等。

通过对男性不育患者的致病基因进行检测，即基因诊断(gene、diagnosis)技术，明确患者遗传病因，是目前明确疾病的诊断、从而进行有效精准的药物等治疗、进而选择合适的辅助生殖助孕方式、保证生育健康后代和避免出生缺陷的有效手段。

目前基因诊断技术主要为基于单个基因外显子区及其侧翼序列的普通一代PCR-Sanger测序技术，该技术设计较为个性化，通用性较低。个性化强也意味着工作量大，周期长，成本高昂，因此当前应用一代PCR-Sanger测序检测不孕不育遗传基因突变，面临极大的挑战。

发明内容

基于此，本发明的目的包括提供检测男性不孕不育的基因文库的构建方法，构建的文库能够用于二代测序，通用性强、诊断率高、耗时短。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

在本发明的第一方面，提供一种检测男性不孕不育的二代测序基因文库的构建方法，所述构建方法包括：

获取样本的基因组DNA；