[发明专利]一种喜树中未知类黄酮化学成分的快速鉴定方法

说明书

本发明属于天然化合物鉴定技术领域。本发明提供了一种喜树中未知类黄酮化学成分的快速鉴定方法，本发明采用冷提技术将喜树组织中的类黄酮类成分快速提取，以确保各类别类黄酮成分的稳定存在；利用UPLC‑MS/MS分析，获得未知类黄酮成分的色谱特征和二级质谱裂解特征；快速筛选已知类黄酮成分和未知类黄酮成分的二级质谱；根据未知类黄酮成分的特征诊断离子和裂解规律，实现对喜树样品中未知类黄酮成分结构的快速解析。本发明提供的方法简单高效，适用大规模类黄酮类成分的鉴别，为喜树中类黄酮成分的结构多样性和合成代谢研究提供了新的方向。

技术领域

本发明涉及天然化合物鉴定技术领域，尤其涉及一种喜树中未知类黄酮化学成分的快速鉴定方法。

背景技术

黄酮化合物是一种广泛分布于自然界的次生代谢物，在植物中扮演有色色素或防御剂的角色。黄酮类成分的C6-C3-C6结构母核通常起源于一分子的4-香豆酰辅酶A单元(B环)和三分子的丙二酰辅酶A单元(A环)，它们通过缩合反应桥接。此外，桥接环(C环)的产生则是由中间C3单元环化形成。根据中心C3单元的状态，类黄酮可进一步分为黄酮、黄酮醇、黄烷酮、查尔酮、氧杂蒽酮和黄烷。这些次生代谢物广泛分布在水果、谷物、蔬菜和药用植物中。类黄酮化合物通常具有抗炎，抗癌，抗高血压，抗冠心病的生物活性。虽然截至2017年已有超过7000种类黄酮被鉴定，但由于不同植物中类黄酮代谢的多样性，类黄酮的数量仍在不断增加。

对于天然产物化学家来说，植物类黄酮成分的结构鉴定一直是一项有趣的工作。如今，基于LC-MS/MS(液相色谱-串联质谱法)的方法已越来越多地应用于快速表征植物中未知的次生代谢物，如生物碱、萜类等成分。由于类黄酮化合物有限的母核类型和取代形式，一张MS/MS谱图可为其鉴定提供足够的结构信息。中间C3单元通常通过逆Diels-Alder反应裂解形成一些特定的诊断离子^i,jA⁺和^i,jB⁺，这些诊断离子常被用于类黄酮类成分结构类别的快速鉴别。A环上的取代基通常可由^i,jA⁺诊断离子的分子量确定，B环上的取代基则由^i,jB⁺诊断离子的分子量确定。不同类别的类黄酮成分如黄酮、黄酮醇、黄烷酮、查尔酮、氧杂蒽酮和黄烷的二级质谱图特征各有迥异。此外，在类黄酮的二级质谱图上，还会出现一系列的甲基、羟基、羰基、葡萄糖基裂解特征。这些信息可进一步提供类黄酮三个环上的取代信息。

喜树是中国特有植物，因其具有产生抗癌成分喜树碱而为人熟知。由于喜树中生物碱类成分结构与活性的多样性，现有研究大多聚焦于发掘并解析其中含有的生物碱类成分。我们已基于质谱裂解规律，从喜树中发掘并鉴定生物碱类成分49种。但在该植物的花、果、茎、叶、幼苗中，我们还检测到数以千记的次生代谢物，绝大多数均处于未鉴别状态。截至目前为止，喜树中仅有7种类黄酮类成分通过HPLC-MS/MS的方式被鉴别。由此我们确定该植物中仍含有大量类黄酮类成分尚待发掘。因此，亟需建立一种适用于喜树不同组织部位样品的快速准确的类黄酮成分鉴定方法。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的缺陷，提供一种喜树中未知类黄酮化学成分的快速鉴定方法。

本发明提供了一种喜树中未知类黄酮化学成分的快速鉴定方法，本发明采用冷提技术将喜树组织中的类黄酮类成分快速提取，以确保各类别类黄酮成分的稳定存在；利用UPLC-MS/MS分析，获得未知类黄酮成分的色谱特征和二级质谱裂解特征；快速筛选已知类黄酮成分和未知类黄酮成分的二级质谱；根据未知类黄酮成分的特征诊断离子和裂解规律，实现对喜树样品中未知类黄酮成分结构的快速解析。本发明提供的方法简单高效，适用大规模类黄酮类成分的鉴别，为喜树中类黄酮成分的结构多样性和合成代谢研究提供了新的方向。