[发明专利]重组人源CXCL16蛋白的表达及复性方法

权利要求书

1.一种重组人源CXCL16蛋白的表达及复性方法，其特征在于，包括如下步骤：

以序列如SEQ ID NO.1所示的基因序列为模板，采用如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的引物组，进行PCR扩增及产物回收，获得目的片段；以包含目的基因的质粒为模板构建至载体pGEX-4T-1，在载体pGEX-4T-1多克隆位点区域添加8his标签，对所述目的片段进行同源重组与转化，鉴定阳性克隆，即得大肠杆菌表达体系；

将大肠杆菌菌株进行活化和接种，置于含氨苄青霉素钠和氯霉素的LB液体培养基中，于37℃、220rpm 条件进行扩大培养，当OD₆₀₀值在0.45~0.55之间，置于0.8mMIPTG、37℃、220rpm条件下诱导培养4h，离心，收集菌体；

将菌体置于破菌液中进行悬浮，超声破碎：将菌体悬浮于包含氯化钠、Tris且pH为 8.0的第一破菌液中，再置于超声功率350W条件下进行间歇性超声破菌，间隔时间为3s，破菌时间5min，再置于冰水混合物中冷却，重复超声破菌，离心，得沉淀；采用包含氯化钠、尿素、磷酸盐且pH为7.4的第二破菌液对沉淀进行重悬，再次置于与上步骤相同的超声条件下进行超声破菌，离心，得包涵体；

对所述包涵体进行标签纯化：采用纯水悬浮包涵体后进行离心，再采用8M尿素的PBS缓冲液溶解，离心，获得包涵体尿素缓冲液，采用NI-IDA琼脂糖凝胶亲和层析，获取包含目的蛋白的洗脱成分，获得纯化后的包涵体溶液；

对所述包涵体溶液进行复性处理，得复性目的蛋白；所述对所述包涵体溶液进行复性处理的步骤为：将包含目的蛋白的洗脱成分转移至透析袋中，于温度4℃条件下，依次放入6M复性液、4M复性液、3M复性液、2M复性液、1M复性液、0.5M复性液中进行复性，在每个梯度的复性液中透析4h；其中，6M复性液为：6M尿素，Tris 50mM，NaCl250mM，精氨酸500mM，甘油1400mM，GSSG 0.2mM，GSH 0.2mM，pH值为8.6；

4M复性液为：4M尿素，Tris 50mM，NaCl250mM，精氨酸500mM，甘油1400mM，GSSG 0.2mM，GSH 0.2mM，pH值为8.5；

3M复性液为：3M尿素，Tris 50mM，NaCl250mM，精氨酸500mM，甘油1400mM，GSSG 0.2mM，GSH 0.2mM，pH值为8.4；

2M复性液为：2M尿素，Tris 50mM，NaCl250mM，精氨酸500mM，甘油1400mM，GSSG 0.2mM，GSH 0.2mM，pH值为8.3；

1M复性液为：1M尿素，Tris 50mM，NaCl250mM，精氨酸500mM，甘油1400mM，GSSG 0.2mM，GSH 0.2mM，pH值为8.1；

0.5M复性液为：0.5M尿素，Tris 50mM，NaCl250mM，精氨酸500mM，甘油1400mM，GSSG0.2mM，GSH 0.2mM，pH值为8.0。

2.根据权利要求1所述的表达及复性方法，其特征在于，所述采用NI-IDA琼脂糖凝胶亲和层析的步骤为：预处理NI-IDA琼脂糖凝胶亲和层析柱基质，将样品与柱基质混合培养，装柱，洗脱杂蛋白，而后采用不同浓度的咪唑洗脱液浸泡基质后再洗脱，收集包含目的蛋白的包涵体洗脱成分。

3.根据权利要求1或2所述的表达及复性方法，其特征在于，还包括对复性蛋白进行生物活性鉴定的步骤。