[发明专利]重组人源CXCL16蛋白的表达及复性方法

说明书

本发明提供一种重组人源CXCL16蛋白的表达及复性方法，创造性选择一段胞内蛋白，采用原核表达宿主并结合特殊的表达条件实现其表达，并有效进行了包涵体复性，采用受体蛋白CXCR6验证目的蛋白具有生物活性。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种重组人源CXCL16蛋白的表达及复性方法。

背景技术

趋化因子是一类由数个氨基酸组成的小分子蛋白，是一种免疫炎性因子，不仅调控免疫细胞的定向游走，参与免疫系统分化成熟，免疫监视，还可以影响肿瘤的生产、侵袭、转移以及调节血管生产等多个过程。

根据结构，趋化因子可分为CXC\CC\CX3C\C四大家族。其中，CXCL16蛋白以跨模型(TM-CXCL16)和分泌型(sCXCL16)两种蛋白形式存在，是迄今为止发现的第二种可以以膜结合方式存在的趋化因子。TM-CXCL16蛋白可以被膜整合素金属蛋白酶ADAM10\ADAM17切割水解，然后从细胞表面脱落，形成sCXCL16。CXCR6蛋白是CXCL16的唯一受体，CXCR6属于G蛋白偶联受体家族成员，具有7次跨膜结构。CXCL16与CXCR6相互作用后，其生物学功能表现在：(1)趋化作用；(2)粘附作用；(3)与细胞因子间的相作用。目前，采用常规路线无法有效表达出具有生物活性的CXCL16蛋白。

发明内容

基于此，有必要提供一种重组人源CXCL16蛋白的表达及复性方法，可以通过原核表达体系获得具有生物活性的重组人源CXCL16蛋白。

本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种编码重组人源CXCL16蛋白的基因，其序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供一种包含编码重组人源CXCL16蛋白的基因的原核表达载体。

本发明还提供一种构建包含编码重组人源CXCL16蛋白的基因的原核表达载体的方法，包括如下步骤：采用如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3的引物组，以目的基因序列为模板，进行PCR扩增及产物回收，获得目的片段；对所述目的片段进行同源重组与转化，鉴定阳性克隆，即得大肠杆菌表达体系。

本发明提供一种重组人源CXCL16蛋白的表达及复性方法，包括如下步骤：将原核表达载体菌株进行活化和接种，扩大培养，诱导表达，收集菌体；将菌体置于破菌液中进行悬浮，超声破碎，获得包涵体；对所述包涵体进行标签纯化，获得纯化后的包涵体溶液；对所述包涵体溶液进行复性处理：采用包含Tris、精氨酸、甘油、GSSG、GSH、氯化钠且pH为8.0～8.6的复性液进行透析，得复性目的蛋白。

在其中一些实施例中，将原核表达载体菌株置于含氨苄青霉素钠和氯霉素的LB液体培养基中进行活化和接种。

在其中一些实施例中，扩大培养和诱导表达的步骤为：含氨苄青霉素钠和氯霉素的LB液体培养基中，于37℃、220rpm条件进行扩大培养，当OD₆₀₀值在0.45～0.55之间，置于0.8mMIPTG、37℃、220rpm条件下诱导培养4h，离心，收集菌体。

在其中一些实施例中，所述超声破碎的步骤为：将菌体悬浮于包含氯化钠、Tris且pH为8.0的第一破菌液中，再置于超声功率350W条件下进行间歇性超声破菌，间隔时间为3s，破菌时间5min，再置于冰水混合物中冷却，重复超声破菌，离心，得沉淀；采用包含氯化钠、尿素、磷酸盐且pH为7.4的第二破菌液对沉淀进行重悬，再次置于与上步骤相同的超声条件下进行超声破菌，离心，得包涵体。

在其中一些实施例中，采用纯水悬浮包涵体后进行离心，再采用8M尿素的PBS缓冲液溶解，离心，获得包涵体尿素缓冲液，采用NI-IDA琼脂糖凝胶亲和层析，获取包含目的蛋白的洗脱成分。