[发明专利]一种非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法、试剂盒及其应用

说明书

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法、试剂盒及其应用。本发明所建立的非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法，其是通过原核表达制备ASFV重组pB602L蛋白，并以ASFV‑B602L蛋白作为待检抗原，建立ASFV间接ELISA抗体检测方法，为ASFV的检测和疾病的特异性诊断提供实验依据，获得特异性好，敏感性高的抗体诊断试剂盒。本发明制备的重组ASFV pB602L蛋白具有良好抗原性，建立的间接ELISA抗体检测方法具有灵敏、特异、高效的特点，适合于ASFV抗体的现场检测。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法、试剂盒及其应用。

背景技术

非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是一种由非洲猪瘟病毒(African swinefever virus， ASFV)引起的猪病毒性疾病，主要导致家猪和野猪发生急性、热性和高度接触性传染病。鉴于非洲猪瘟的严重性，世界动物卫生组织(OIE)已将其列为法定动物疫病，在我国也是一级动物传染病。家猪急性感染非洲猪瘟可导致100％的死亡率。世界卫生组织(OIE)已将ASF列为法定报告的动物疾病。该病毒已在全球范围内传播。该病毒的某些特征与虹彩病毒科和痘病毒相似。

ASFV是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)的唯一成员，该病毒的某些特征与虹彩病毒科和痘病毒相似，也是虫媒病毒DNA病毒。电镜检测结果显示，ASFV的形状为二十面体，直径约260nm。病毒颗粒的结构比较复杂，由内向外由五层组成：核仁、核壳、内包膜、衣壳和外包膜。ASFV是一种大型包膜病毒，具有二十面体形态，平均直径为200nm。病毒基因组由单分子线性、共价封闭端双链DNA组成。不同分离株的基因组长度在170到190 kbp之间，目前研究得到的基因组大小的显着差异主要是由于多基因家族(MGF)的基因拷贝的增加或丢失以及ASFV基因组非编码区串联重复序列数量的变化。ASFV编码151到 167个开放阅读框，编码170多种蛋白质，目前ASFV大多数蛋白的结构功能还有待研究。

非洲猪瘟具有复杂的流行病学特征。受感染的家猪、野猪、软蜱、受污染的饲料(包括原料和泔水)、水、精液、猪肉、人员、车辆和工具是ASFV的主要传染源。此外，螫蝇、水蛭和其他吸血昆虫也可能是ASFV感染的来源。传染源长期携带病毒，是非洲猪瘟防控的难点之一。由于非洲猪瘟病毒分离株的毒力、感染途径和剂量以及宿主特征，这使感染 ASFV的猪只显示出不同的临床表现和病理损害。ASFV毒株通常分为高毒力、中等毒力和低毒力。高毒力的强毒株通常导致该病的最急性型(猪在感染后1-4天死亡)和急性型(猪在感染后3-8天死亡)，而中等毒性菌株与急性型(猪在感染后11-15天死亡)和亚急性型 (猪在感染20天后死亡)感染有关，慢性型与中低毒力分离株的感染有关。

基于以上，快速、灵敏以及可现场部署的ASFV检测对于疾病监测和控制非常重要。目前用于早期诊断ASF的方法包括免疫印迹试验、抗原间接酶联免疫吸附(ELISA)、聚合酶链式反应(PCR)试验、巢式PCR检测、PCR检测、实时荧光定量PCR、交叉引发扩增(CPA)分析、聚合酶交联螺旋反应(PCLSR)分析和环介导等温扩增(LAMP)测定。其中，间接ELISA可用于ASFV感染猪样本的抗体检测。间接ELISA方法具有特异性好、灵敏度高以及操作方便的特点，适用于大批样品的检测。这些重组抗原的获得方式相对简单，与从感染细胞中获取抗原相比，在生产过程中无需使用病毒，增加了安全性且在抗原生产过程中更易标准化。

发明内容