[发明专利]来源于肿瘤患者胸腹水的具有肿瘤特异性杀伤效果的T淋巴细胞及其制备方法和细胞制剂

权利要求书

1.一种来源于肿瘤患者胸腹水的具有肿瘤特异性杀伤效果的T淋巴细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.将胸腹水样本离心、洗涤，用培养基重悬细胞并计数；

S2.取2.0-3.0×10⁷个步骤S1获得的细胞加入到预先包被的细胞培养瓶中，加入完全培养基至细胞终浓度0.4-0.6×10⁹/L，补加IFN-γ至终浓度500-2000IU/mL，进行细胞培养；细胞培养瓶预先包被的方法为：用含有CD3和CD28单抗的T淋巴细胞完全培养基包被培养瓶置于37℃，5.0% CO₂条件下0.5-1 h；

S3.培养24h-48h后，取细胞悬液计数，将其余细胞悬液全部转移至预先包被的细胞培养瓶中，细胞培养瓶包被方法同步骤S2；根据计数结果，补加完全培养基将细胞浓度调整为0.4-0.6×10⁹/L，补加IFN-γ至终浓度500-2000IU/mL，进行细胞培养；

S4.每日观察细胞状态，每间隔24h取细胞悬液计数，根据细胞计数补加完全培养基将细胞浓度调整至0.4-0.6×10⁹/L，进行连续培养；

S5.当培养体系总体积为180-200mL时，取细胞悬液计数，将其余细胞悬液全部转移至细胞培养袋中，根据细胞计数补加完全培养基将细胞浓度调整至0.4-0.6×10⁹/L，按照20-50ng/mL向培养袋中补加CD3和CD28单抗，继续进行细胞培养；

S6.每日观察细胞状态，每间隔24h取细胞悬液计数，根据细胞计数补加完全培养基将细胞浓度调整至0.4-0.6×10⁹/L，进行连续培养；

S7.当培养体系终体积达到1.6-2.0 L时，每日进行细胞计数，直到细胞浓度增至2.0-2.5×10⁹/L时，回收全部细胞。

2.根据权利要求1所述的一种来源于肿瘤患者胸腹水的具有肿瘤特异性杀伤效果的T淋巴细胞的制备方法，其特征在于：所述完全培养基为含有10-20 v%胎牛血清、4000-6000IU/mL白细胞介素2和2 v% 50X必需氨基酸的X-VIVO 15培养基。

3.根据权利要求1所述的一种来源于肿瘤患者胸腹水的具有肿瘤特异性杀伤效果的T淋巴细胞的制备方法，其特征在于：步骤S2、S3中，CD3和CD28两种单抗的含量为20-50ng/cm²。

4.一种权利要求1-3任一所述制备方法制备得到的来源于肿瘤患者胸腹水的具有肿瘤特异性杀伤效果的T淋巴细胞。

5.一种治疗恶性胸腹腔积液的细胞制剂，其特征在于：包括权利要求4所述的来源于肿瘤患者胸腹水的具有肿瘤特异性杀伤效果的T淋巴细胞。