[发明专利]用于特异性识别胰岛素的基于鸟嘌呤的花菁探针及其制备方法

说明书

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种用于特异性识别胰岛素的基于鸟嘌呤的花菁探针及其制备方法。首先将花菁染料CY5.5与鸟嘌呤在酰胺缩合剂1‑乙基‑(3‑二甲基氨基醛)碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)和1‑羟基苯并三唑(HOBt)作用下反应，所得粗品通过薄层色谱法分离，得到最终产物基于鸟嘌呤的花菁探针CY5.5G。本发明得到的花菁探针具有优良的光学性能并可以特异性识别胰岛素，有利于对胰岛素的检测。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种用于特异性识别胰岛素的基于鸟嘌呤的花菁探针及其制备方法。

背景技术

胰岛素(Insulin)在上世纪20年代由加拿大医生首次发现并获得了1923年的诺贝尔生理学奖，为糖尿病患者提供了安全有效的治疗方法，减轻了患者的痛苦并挽救了无数患者的生命，成为医学发展史上重要的里程碑之一。在慢性疾病中，糖尿病是一种由于靶组织胰岛素释放不足或胰岛素作用丧失而引起糖脂代谢异常从而导致长期高血糖的代谢紊乱。胰岛素通过促进血液中葡萄糖吸收到肝脏、脂肪和骨骼肌细胞中来调节碳水化合物、脂肪和蛋白质的代谢。胰岛素分泌功能障碍可引起糖尿病和高胰岛素血症，增加了失明、肾功能衰竭、心肌梗死、心脏病、肥胖、中风、神经退行性疾病等严重疾病的危险因素，成为备受关注的公共卫生问题。

众所周知，胰岛素水平是诊断糖尿病的一个有价值的指标。因此，胰岛素的传感和检测不仅对临床诊断具有重要意义，对药物质量管理也具有重要意义。

在过去的几十年里，各种分析技术，包括酶联分析、放射免疫分析、高效液相色谱、毛细管电泳、电化学分析、电化学发光、光电化学分析已经发展起来并且用于胰岛素检测。虽然这些方法表现出了良好的性能，但大多数方法都是耗时、繁琐、昂贵或费力的，因此难以进行快速检测。因此，设计一种简单、有效、快速的胰岛素分析方法是必要的。

发明内容

为了克服现有荧光传感器的选择性低和灵敏度较低，毒性较大的不足，本发明提供了一种基于鸟嘌呤的花菁探针，该探针的结构式为：

本发明还提供了一种基于鸟嘌呤的花菁探针的制备方法：

(1)制备花菁染料CY5.5；

(2)将花菁染料CY5.5与有机碱三乙胺(Et₃N))、缩合剂碳酰二亚胺盐酸盐(EDCI)、1-羟基苯并三唑(HOBt)在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中室温搅拌活化0.5～1小时，然后加入鸟嘌呤常温反应24～48小时，最后通过薄层色谱法提纯得到最终产品CY5.5G。

其中，花菁染料CY5.5与鸟嘌呤的摩尔当量比为：1:2～1:3；

EDCI、HOBt、Et₃N和CY5.5的摩尔比为1:1:2:0.5～1:1:0.25:3.5；

薄层色谱法所用的展开剂为体积比为30:1的二氯甲烷和甲醇的混合物。

以上制备方法的化学反应为：

本发明还提供了一种上述染料探针的应用：所制备的基于鸟嘌呤的花菁探针在磷酸缓冲盐溶液(PBS)和表面活性剂十二烷基苯磺酸(SDBS)的混合溶液体系下，快速简便地检测胰岛素。

混合溶液为体积比为9.25:0.75～7.5:2.5的浓度为10mM的缓冲溶液PBS与浓度为4mM的表面活性剂SDBS的混合溶液，混合后SDBS最终浓度范围为0.3mM～1.0mM，PBS最终浓度范围为7.5mM～9.25mM。