[发明专利]高效液相色谱分析司来帕格中溴乙酸杂质的方法

说明书

本发明提出高效液相色谱分析司来帕格中溴乙酸的方法，其采用反相高效液相色谱柱，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱填料，pH值2.1‑2.3的磷酸‑磷酸钠缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，采用梯度洗脱。本发明的方法能以紫外检测器检测溴乙酸，实现用普通仪器便捷地监控司来帕格中该基因毒性杂质的含量，具有较好的专属性、稳定性和精确度。

技术领域

本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种用高效液相色谱评价药物质量的方法。

背景技术

司来帕格，英文名Selexipag，化学名2-{4-[(5,6-二苯基吡嗪-2-基)(丙烷-2-基)氨基]丁氧基}-N-(甲磺酰)乙酰胺，是一种优良的PGI2受体激动，具有出血小板凝集抑制作用、血管扩张作用、支气管肌扩张作用、脂质沉淀抑制作用、白血球活化抑制作用等多种功效，在治疗肺动脉高压方面具有很好的效果，2018年在中国上市，需求量大。

现行国家标准HJ758-2015采用气相色谱法测水质中溴乙酸，该方法先用硫酸酸化的甲醇溶液对溴乙酸进行衍生，然后再进行气相色谱分析，该衍生的步骤比较费时，便利性较差。

CN 108828081 A以液相色谱质谱联用为基础，采用阴离子交换色谱进行分离，采用负离子模式的多反应监测(MRM)对溴乙酸进行检测。该方法对仪器要求高，检测成本高，且操作过程麻烦。

发明内容

本发明提出一种高效液相色谱分析方法，用来监测司来帕格中的基因毒性杂质溴乙酸的含量，本方法使用普通的紫外检测器来检测，方法简单准确、高效易操作，且不受司来帕格中其它多种有机杂质及残留溶剂组分的干扰。

根据本发明，其采用如下检测条件：

色谱柱：采用十八烷基硅烷键合硅胶柱；

流动相：以磷酸-磷酸钠缓冲液(pH值2.1-2.3)为流动相A，以乙腈为流动相 B；采用梯度洗脱，梯度洗脱程序如下：

表1

在一个优选实施方式中，供试品溶液的制备为：取司来帕格200mg，置10ml 量瓶中，加入2ml乙腈，不超过65℃、优选60℃的水浴加热至溶解，再加入流动相A，边加边振摇并稀释至刻度，摇匀后静置，离心，取上清液再次离心，取上清液即得。

在一个优选实施方式中，对照品溶液的制备包括：取溴乙酸对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成每lml中含9-10μg的溶液，所述溶剂为乙腈与流动相A按体积比20︰80的混合液。

在一个优选的实施方式中，采用紫外检测器检测，检测波长为190-250nm，优选地为205nm。流速范围为0.9～1.1ml/min，优选1.0ml/min。

本发明中，色谱柱柱温为38～42℃，优选40℃。

用于本发明的检测器可以采用紫外检测器，检测波长为190-400nm。

附图说明

图1为本发明条件下专属性试验叠加图。

具体实施方式

下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案。表2列出实施例中所使用材料的详细信息。

表2实验用对照品及样品信息

供试品与对照品溶液的制备

发明人通过将不同样品配制方式做了对比，从结果看出方法3回收率良好，即供试品采用60℃水浴加热至溶解，再加入流动相A，边加边振摇并稀释至刻度，摇匀后静置2h，将溶液转移至离心管中，每分钟5000转离心10分钟，取上清液同法再次离心，取上清液得供试品溶液。