[发明专利]一种毛细管高压液相色谱柱及其超声制备方法和应用

权利要求书

1.一种毛细管高压液相色谱柱的超声制备方法，其特征在于，所述超声制备方法包括采用中压匀浆超声填充法对毛细管柱进行装填，具体的：

使用有机溶剂将色谱柱填料配制成匀浆液，并保持其均匀分散；将毛细管柱一端插入匀浆液中，同时并对毛细管柱进行超声处理，在惰性气体以及超声振动作用下，填料向毛细管柱塞处移动并逐渐积累；填充至2～3cm处时调整惰性气体压力至4～5MPa并保持恒压进行填充。

2.如权利要求1所述的超声制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为色谱级别有机溶剂，优选的，所述有机溶剂为甲醇。

3.如权利要求1所述的超声制备方法，其特征在于，所述色谱柱填料为反向色谱填料，包括C18反向色谱柱填料，填料的粒径为1.9μm-5μm。

4.如权利要求1所述的超声制备方法，其特征在于，所述惰性气体为氮气。

5.如权利要求1所述的超声制备方法，其特征在于，所述毛细管柱为带筛板的毛细管，优选的，所述带筛板的毛细管制备方法包括：

配置比例为kasil 1624:kasil 1：甲酰胺＝1～3:1:1均质液，将毛细管插入液面以下，均质液上升大于1cm时快速拔出毛细管，之后将毛细管置于高温(如80-90℃)环境中3-4h即得。

6.如权利要求1所述的超声制备方法，其特征在于，

当毛细管柱柱长在20cm(含20cm)以内时，直接使用一步法进行填充，即在上述恒压下持续填充直至所需长度，氮气吹干；随后将氮气压力降为零，卸下毛细管柱；将毛细管柱连接到液相色谱泵上，利用分段式逐步增加压力，将毛细管柱内色谱填料压实，得到可使用的毛细管柱；

当毛细管柱柱长20cm-25cm(含25cm)时，使用二步法进行填充，具体的，首先按照上述恒压填充至20cm，之后调整毛细管柱至匀浆液面以上，氮气吹干，其次再次重复将毛细管柱插入匀浆液面以下，恒定压力填充直至所需长度；然后将氮气压力降为零，卸下毛细管柱；将毛细管柱连接到液相色谱泵上，利用分段式逐步增加压力，将毛细管柱内色谱填料压实，得到可使用的毛细管柱；

当毛细管柱柱长25cm-30cm，使用三步法进行填充，具体的，首先持续填充至20cm，氮气吹干，第二步为填充至25cm，第三步为填充至所需长度；所述第三步具体方法包括：将氮气压力降为零，卸下毛细管柱；将毛细管柱连接到液相色谱泵上，利用分段式逐步增加压力，将毛细管柱内色谱填料压实，得到可使用的毛细管柱。

7.如权利要求6所述的超声制备方，其特征在于，所述液相色谱泵产生的高压最大压力控制在200bar到500bar之间。

8.权利要求1-7任一项所述超声制备方法获得的毛细管高压液相色谱柱。

9.权利要求8所述毛细管高压液相色谱柱在蛋白质组学研究中的应用。

10.如权利要求9所述应用，其特征在于，所述应用包括采用权利要求8所述毛细管高压液相色谱柱对复杂微量的多肽进行高效率分离。