[发明专利]一种毛细管高压液相色谱柱及其超声制备方法和应用

说明书

本发明属于毛细管色谱柱制备领域，具体涉及一种毛细管高压液相色谱柱及其超声制备方法和应用。本发明是将色谱填料制备成匀浆液并处在不断搅拌均匀的状态，使带柱塞的毛细管与匀浆液联通，同时对毛细管柱上施加超声处理，使用大面积直接接触式超声，更加分散毛细管内的填料颗粒，使填料更加均匀累积装填毛细管。此外，对于较长毛细管柱采用多次循环装填进行制备。此外该方法可装填较小粒径1.9μm、长度为30cm及以内的毛细管柱，装填的毛细管柱搭配金属喷针使用，具有较长的使用寿命，从而具有良好的实际应用之价值。

技术领域

本发明属于毛细管色谱柱制备领域，具体涉及一种毛细管高压液相色谱柱及其超声制备方法和应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

蛋白质组学的快速发展迫切需要高效的纳流液相色谱分离技术。毛细管色谱柱是实现复杂微量多肽高效率分离的必要工具，是纳流液相色谱分离技术中的重要部分。

毛细管色谱柱的装填直接影响到其分离效果。装填不好的色谱柱，色谱柱内填料分布不均匀或是不紧实，检测分离度低效，色谱峰型不好；或者在短时间使用后，柱效显著下降。良好的装填方法对获得高柱效和高稳定性的毛细管色谱柱是十分重要的。

复杂的柱塞制备和柱填充方面限制毛细管柱的制备效率。近年来有报道分离柱与喷针一体化的毛细管柱。但是这种毛细管拉制针尖需要昂贵的专用设备，成功率也不高，并且很难制备较长的毛细管柱；此外针尖很容易损坏，造成喷雾效果不佳甚至是柱填料流失，很难实现较长的柱使用寿命。

匀浆填充法是常用的液相色谱柱的填充方法。在氮气提供的压力下持续将匀浆液填料压入柱管中，形成色谱柱柱床层。床层产生的反压与填料粒径、装填的长度相关，粒径小于2μm的填料装填的色谱柱通常小于10cm。若不改进装填方法，装填更长的毛细管柱，往往需要更大的装柱压力，需要配置专门的真空泵等设备，增加装柱成本和安全隐患。

发明内容

针对现有装柱技术方法中存在毛细管柱制备成功率低、使用寿命较短、较小填料粒径在中低压下难以制备较长长度等问题，本发明提供一种毛细管高压液相色谱柱及其超声制备方法和应用。本发明是将色谱填料制备成匀浆液并处在不断搅拌均匀的状态，使带柱塞的毛细管与匀浆液联通，同时对毛细管柱上施加超声处理，使用大面积直接接触式超声，更加分散毛细管内的填料颗粒，使填料更加均匀累积装填毛细管。此外，对于较长毛细管柱采用多次循环装填进行制备。此外该方法可装填较小粒径1.9μm、长度为30cm及以内的毛细管柱，装填的毛细管柱搭配金属喷针使用，具有较长的使用寿命，从而具有良好的实际应用之价值。

具体的，本发明涉及如下技术方案：

本发明的第一个方面，提供一种毛细管高压液相色谱柱的超声制备方法，所述超声制备方法包括采用中压匀浆超声填充法对毛细管柱进行装填，具体的：

使用有机溶剂将色谱柱填料配制成匀浆液，并保持其均匀分散；将毛细管柱一端插入匀浆液中，同时并对毛细管柱进行超声处理，在惰性气体以及超声振动作用下，填料向毛细管柱塞处移动并逐渐积累；填充至2～3cm(优选为3cm)处时调整惰性气体压力至4～5MPa并保持恒压进行填充。

其中，所述有机溶剂为色谱级别有机溶剂，在本发明的一个具体实施方式中，所述有机溶剂为甲醇。

所述色谱柱填料可以是反向色谱填料，如C18反向色谱柱填料，填料的粒径为1.9μm-5μm，采用本发明制备方法特别适于小粒径色谱柱填料。

所述惰性气体可以为氮气。

所述毛细管柱为带筛板的毛细管，具体的，所述带筛板的毛细管制备方法包括：