[发明专利]一种卵细胞激活培养基及其培育方法和应用

说明书

本申请涉及辅助生殖技术领域，更具体地说，它涉及一种卵细胞激活培养基及其培育方法和应用。所述卵细胞激活培养基包括基础培养液和激活组分：所述激活组分包括钙离子载体2‑6μmol/L、IGF‑2 1‑100 nmol/L、人血清蛋白0.005‑5 g/L、β‑烟酰胺单核苷酸0.02‑0.05 mg/L、辅酶Q10 0.1‑2.0 mg/L。本申请中通过激活组分与基础培养基的复配，可有效提高卵细胞的激活率，并达到减少因精卵结合时因卵子激活缺陷，导致诱导减数无法正常进行分裂的现象，可将受精失败率降至10‑30%。

技术领域

本申请涉及辅助生殖技术领域，更具体地说，它涉及一种卵细胞激活培养基及其培育方法和应用。

背景技术

辅助生殖技术是人类辅助生殖技术的简称，是指将患者双方的卵子与精子取出后，在体外进行受精，然后再将受精卵或者胚胎移植回母体子宫内发育成胎儿的技术，其中卵母细胞的激活状态则是决定着最终的受精率的关键之一，因此也成为了现阶段所首要攻克的技术问题。

相关技术中的卵母细胞培育激活即先通过成熟促进因子(MPF)和细胞生长抑制因子(CSF)的调节作用，促使卵母细胞发育停滞在MII期(第二次减数分裂中期)，再在受精前通过增加Ca²⁺浓度形成钙波及震荡，以破坏CSF和MPF活性，继而使得卵母细胞内的各种代谢活动重新活跃的技术。

经上述激活步骤处理后的卵母细胞可自MII期完成减数分裂，形成原核(PN)，释放第二极体(2Pb)，完成受精过程，但受限于卵母细胞的激活率，其受精失败率普遍高达40％或以上，因此迫切需要提供一种能有效保障卵子激活率，诱导减数分裂正常进行的激活培养基及培育技术。

发明内容

为保障卵细胞的激活率，以减少因精卵结合时因卵子激活缺陷，导致诱导减数无法正常进行分裂的现象，本申请提供一种卵细胞激活培养基及其培育方法。

第一方面，本申请提供一种卵细胞激活培养基，采用如下的技术方案：

一种卵细胞激活培养基，所述卵细胞激活培养基包括基础培养液和激活组分：

所述激活组分包括钙离子载体2-6μmol/L、IGF-2 1-100nmol/L、人血清蛋白0.005-5g/L、β-烟酰胺单核苷酸0.02-0.05mg/L、辅酶Q10 0.1-2.0mg/L。

通过采用上述技术方案，该配比及组成的激活组分其与基础培养基的复配后，可通过多种组分的协同效应有效提高卵细胞的激活率，并显著减少因精卵结合时因卵子激活缺陷，导致诱导减数无法正常进行分裂的现象，可将受精失败率降至10-30％；

推测其原因可能是由于该组分下的激活组分除能在激活阶段有效模拟体内环境降低并抑制CSF和MPF的活性外，还可促使钙波的形成，以及增强对CSF和MPF震荡破坏效果，继而使得卵母细胞内的各种代谢活动被重启且有利于后续精子的穿透结合。

优选的，所述基础培养液为包括如下组分的水溶液：无机盐缓冲组分30-80g/L、氨基酸组分1-22g/L、葡萄糖0.5-1.2g/L、乳酸钙0.1-2.0g/L、乳酸钠1.0-5.0g/L、丙酮酸钠0.1-0.8g/L、四元羧酸乙二胺四乙酸0.001-000.5g/L、丙氨酰-谷氨酰胺0.1-1.5g/L。

优选的，所述无机盐缓冲组分由氯化钠、氯化钾、磷酸二氢钠、硫酸镁、碳酸氢钠、氯化钙和水按摩尔比(5-10)：(0.3-0.8)：(0.05-0.1)：(0.2-1.6)：(1.0-3.5)：(0.05-0.3)：(900-1000)组成。

优选的，所述氨基酸组分由L-苯丙氨酸、L-羟脯氨酸、丝氨酸、甘氨酸、L-缬氨酸、L-天门冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酸按摩尔比(0.01-0.1)：(0.01-0.1)：(0.01-0.1)：(0.01-0.1)：

(0.01-0.1)：(0.01-0.16)：(0.06-0.24)：(0.06-0.24)组成。