[发明专利]胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）HCQ-DOX@HSA的制备：取1-8mg的GSH加入到1-5mL超纯水中，涡旋、溶解，得GSH水溶液；取10-40mg的HSA加入到1-5mL超纯水中，涡旋、溶解，得HSA水溶液，将GSH水溶液加入到HSA水溶液中，在37℃条件下搅拌反应30-120min，得到还原性的人血清白蛋白，用饱和Na₂CO₃水溶液调节pH至7-10，再加入2-10mg的DOX和2-10mg的HCQ搅拌8-15h，滴加100-200μL的3%过氧化氢溶液，反应10-60min，转移至MWCO=100kD的透析袋中，用超纯水透析4-12h除去游离药物，即得HCQ-DOX@HSA；

（2）HCQ-DOX@HSA-EcN-HAases的制备：用LB肉汤培养基培养EcN，得10⁸CFU/mL的EcN菌液，取0.5-1.5mL浓度为10⁸CFU/mL的EcN菌液，重悬在0.5-3mL的8-25mmol/L CaCl₂水溶液中，超声10-60min，得到EcN-Ca²⁺，使EcN菌液表面带正电，滴加1-5mL HCQ-DOX@HSA和1mgHAases，25-28℃下，搅拌30-120min，4000r/min离心10min，弃去上清液，得沉淀，即得。

2.根据权利要求1所述的胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法，其特征在于，

（1）HCQ-DOX@HSA的制备：取5mg的GSH加入到2mL超纯水中，涡旋使溶解，取25mg的HSA加入到2mL超纯水中涡旋使溶解，将GSH水溶液加入到HSA水溶液中，在37℃条件下搅拌反应50min，得到还原性的HSA，用饱和的Na₂CO₃水溶液调节pH至8，再加入5mg的DOX和5mg的HCQ搅拌10h后，滴加150μL的3%过氧化氢溶液，反应40min，转移至MWCO=100kD的透析袋中，用超纯水透析8h除去游离药物，即得HCQ-DOX@HSA；

（2）HCQ-DOX@HSA-EcN-HAases的制备：用LB肉汤培养基培养EcN，得10⁸CFU/mL的EcN菌液，取0.8mL浓度为10⁸CFU/mL的EcN菌液,重悬在1mL的12mmol/L CaCl₂的水溶液中，超声25min，得到EcN-Ca²⁺，使EcN菌液表面带正电，滴加2.5mL的HCQ-DOX@HSA和1mg HAases，26℃下，搅拌40min，4000r/min离心10min，弃去上清液，得沉淀，即得。

3.根据权利要求1所述的胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法，其特征在于，

（1）HCQ-DOX@HSA的制备：取5mg的GSH加入到4mL超纯水中，涡旋使溶解，取15mg的HSA加入到4mL超纯水中涡旋使溶解，将GSH水溶液加入到HSA水溶液中，在37℃条件下搅拌反应50min，得到还原性的HSA，用饱和的Na₂CO₃水溶液调节pH至8，再加入5mg的DOX和5mg的HCQ搅拌10h后，滴加120μL的3%过氧化氢溶液，反应30min，转移至MWCO=100kD的透析袋中，用超纯水透析10h除去游离药物，即得HCQ-DOX@HSA；

（2）HCQ-DOX@HSA-EcN-HAases的制备：用LB肉汤培养基培养EcN，得10⁸CFU/mL的EcN菌液，取0.8mL浓度为10⁸CFU/mL的EcN菌液,重悬在2mL的12mmol/L CaCl₂的水溶液中，超声25min，得到EcN-Ca²⁺，使EcN菌液表面带正电，滴加2.5mL的HCQ-DOX@HSA和1mg HAases，28℃下，搅拌30min，4000r/min离心10min，弃去上清液，得沉淀，即得。