[发明专利]胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法及其应用

说明书

本发明涉及胰腺癌化疗‑免疫治疗递药系统的制备方法及其应用，有效解决胰腺癌基质屏障和免疫逃避问题，具体步骤如下：（1）双载药白蛋白纳米粒的制备；（2）双载药白蛋白纳米粒和HAases共包覆EcN的制备。本发明制备方法简单，该系统利用EcN和人血清白蛋白的共靶向作用，在透明质酸酶的辅助下，穿透基质屏障，将纳米粒送达肿瘤深层部位；DOX具有化疗和诱导免疫原性细胞死亡的双重作用；HCQ调控肿瘤细胞自噬行为，逆转深度免疫抑制性微环境，放大化疗药的ICD效应；EcN能够增强免疫治疗效果，从而有效解决了胰腺癌基质屏障和免疫逃避问题。

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是一种胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法及其应用。

背景技术

胰腺癌因恶性度高、生存率低被称为癌症之王，其治疗的难点主要在于基质屏障。胰腺癌组织中布满结缔组织、纤维化等，极度缺血缺氧，这些东西就像一堵致密的篱笆墙，固若金汤，把癌细胞完美的保护起来，将化疗药和免疫细胞阻挡在外面，导致常规的化疗和免疫治疗难以发挥作用。因此，克服基质屏障是提高胰腺癌化疗和免疫治疗效率的关键。胰腺癌组织中的重要成分，就是透明质酸(HA)。透明质酸酶(HAases)能够水解透明质酸，拆除胰腺癌周围的篱笆墙，之后化疗药和免疫细胞就可以长驱直入，更好地到达胰腺癌的中心区域，发挥化疗-免疫治疗的联合作用。

大肠杆菌Nissle1917(EcN)是一种兼性厌氧菌，有鞭毛，具有运动性。利用该菌对缺氧性肿瘤核心偏好的生物特性，静脉注射后作为活菌体，可主动靶向肿瘤乏氧部位，使得携带的化疗药更好到达胰腺癌中心区域，增强抗癌疗效。此外，通过对细菌与癌症治疗关系的深入研究，研究者发现细菌本身可以促进巨噬细胞释放白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，从而激活T细胞(T-cell)，增强肿瘤免疫治疗效果。

ICD是调节性细胞死亡的一个特定死亡方式，可以诱导针对死亡细胞抗原的适应性免疫。垂死的肿瘤细胞可以释放肿瘤相关抗原(TAAs)，这些抗原通过树突状细胞的抗原提呈作用传递给T-cell，从而促进细胞毒性T细胞(CTLs)的招募和活化，触发有效的抗肿瘤免疫应答。研究表明，阿霉素(DOX)可以引起癌细胞的ICD，激活抗肿瘤免疫反应。但是，肿瘤具有多种免疫逃逸机制，以逃避免疫系统的监测和消除。最新研究表明，胰腺癌免疫逃避的一个重要原因是癌细胞本身发生了变化，导致肿瘤细胞不会呈递MHC抗原。在胰腺癌细胞中，大多数MHC I类分子并不存在于细胞表面，而是存在于自噬体和自溶酶体中。而通过药物或基因工程等方法抑制肿瘤细胞自噬，可恢复MHC I类分子的表面表达，进而增强抗原递呈。而如何精准调控胰腺癌细胞自噬，改善胰腺癌免疫抑制性微环境，放大化疗药物的ICD效应，实现胰腺癌化疗-免疫治疗的联合作用，是目前急需解决的问题。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明之目的就是提供一种胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法及其应用，可有效解决胰腺癌基质屏障和免疫逃避问题。

本发明的技术方案是，一种胰腺癌化疗-免疫治疗递药系统的制备方法，具体步骤如下：

(1)HCQ-DOX@HSA(双载药白蛋白纳米粒)的制备：取1-8mg的GSH(谷胱甘肽)加入到1-5mL超纯水中，涡旋、溶解，得GSH水溶液；取10-40mg的HSA加入到1-5mL超纯水中，涡旋、溶解，得HSA水溶液，将GSH水溶液加入到HSA水溶液中，在37℃条件下搅拌反应30-120min，得到还原性的人血清白蛋白(HSA)，用饱和Na₂CO₃水溶液调节pH至7-10，再加入2-10mg的DOX和2-10mg的HCQ搅拌8-15h，滴加100-200μL的3％过氧化氢溶液，反应10-60min，转移至MWCO＝100kD的透析袋中，用超纯水透析4-12h除去游离药物，即得HCQ-DOX@HSA；