[发明专利]母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法

权利要求书

1.一种母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述分析方法包括：

将待测母乳样品进行预处理；随后利用LC-MS质液联用色谱对预处理后的待测母乳样品进行检测，通过与叶酸和五甲基四氢叶酸的对照品溶液比较进行定量、定性分析。

2.根据权利要求1所述的母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述待测母乳样品包括人母乳、动物乳汁、复原乳中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述预处理包括对待测母乳样品依次进行水解孵育、弱碱皂化和固相萃取的步骤。

4.根据权利要求3所述的母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述水解孵育的温度为37℃，时间为1～24小时；

优选地，所述水解孵育的保护剂为1％抗坏血酸和0.5％巯基乙醇的水溶液。

5.根据权利要求3所述的母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述弱碱皂化为：

在水解孵育后的待测母乳样品中加入氨水，随后60～90℃金属浴5～30min。

6.根据权利要求3所述的母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述固相萃取的萃取板为Waters Oasis MAX 96-well μElution Plate。

7.根据权利要求1所述的母乳中叶酸和五甲基四氢叶酸的检测方法，其特征在于，所述LC-MS质液联用色谱的色谱条件包括：

液相分析色谱柱：Acquity UPLC HSS T3(50mm*2.1mm,1.8μm)；

柱温：40℃；进样量：5μL；

A相为0.1％甲酸水，B相为乙腈；

梯度洗脱程序为：

时间(min)	流速(mL/min)	A相：0.1％甲酸水	B相：纯乙腈
0	0.4	95	5
1.5	0.4	85	15
2	0.4	20	80
2.5	0.4	20	80
2.51	0.4	95	5
3	0.4	95	5

。